Page 58 - 《中国药科大学学报》2026年第2期

184 学报 Journal of China Pharmaceutical University 2026, 57(2): 181 − 188 第 57 卷

1.3 基于测序技术的标记技术 为 C，其他为 A。Chang 等 [12] 比对 10 个罂粟属物
基于测序的分子标记技术是新一代分子标记 种，筛选出 3 个候选 SNP 位点，并验证其鉴别效力，
类型，通过测定 DNA 序列，分析基因组水平上的核 证实这些位点能可靠区分毒品与非毒品罂粟物种。
苷酸变异，实现物种鉴别、基因分型、遗传图谱构建
2 DNA 条形码
等目的。
单 核 苷 酸 多 态 性 标 记 （ single nucleotide DNA 条形码技术由 Paul D N Hebert 等 [13] 于
polymorphism，SNP）是指基因组中由单个核苷酸变 2003 年首次提出，建议将线粒体基因细胞色素氧化
异所导致的 DNA 序列多态性，可位于编码区（如引 酶 I（COI）作为动物 DNA 鉴定的核心，引起了广泛
起错义突变）、非编码调控区或基因间区域，是分布 关注。该技术利用基因组中一段公认的、较短且具
最广、数量最丰富的遗传标记类型。尽管单个 有物种代表性的 DNA 序列，通过其高度变异的特
SNP 多态性信息含量较低，但其数量多、分布广、 性构建物种特有的“遗传身份证”，通过 PCR 扩增
稳定性高、易于分型和自动化检测，因此成为群体 目 标 片 段 并 进 行 测 序 ， 将 所 得 序 列 与 BOLD、

遗传学和物种进化研究的重要工具。SNP 直接体 GenBank 等全球数据库比对，可实现快速、准确的
现序列变异，可通过高通量测序或芯片技术进行全 物种鉴定，特别适用于形态不完整或幼期样本（如
基因组分型，无需凝胶电泳，是目前最具发展潜力 图 2）。作为植物 DNA 条形码的遗传位点需满足
的分子标记，已广泛应用于遗传学、法医学和疾病 3 个标准：（1）在物种水平具有较高的变异性和区分
诊断等领域。Zhang 等 [11] 基于罂粟 DNA 构建文 度；（2）序列较短，便于提取和扩增；（3）存在开发通
库，筛选出 16 个 SNP 位点，并验证了其中 2 个纯合 用引物的保守侧翼位点 。该技术可用于大麻、罂
[14]
位点可准确区分毒品罂粟与中国其他 6 种罂粟属 粟、恰特草等毒品原植物的物种鉴定 [15−18] 。常用数
植物：罂粟在 SNP1 位点为 G，其他为 A；SNP2 位点 据库见表 1。

样本DNA 序列通用引物PCR扩增 测序 数据库序列比对
图 2 DNA 条形码技术一般流程

表 1 DNA 条形码常用数据库 和 ITS2。ITS 序列在种间变异大、种内变异小，兼
数据库 网 址 具引物保守性好、长度适中、扩增稳定等优势，已
GeneBank http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ 成为植物种属鉴定中最常用的 DNA 条形码和
EMBL-ENA https://www.ebi.ac.uk/
测序靶点之一 [14,19] 。近年来，基于 ITS 序列多态性
DNA Data Bank of https://www.ddbj.nig.ac.jp/index-e.html 和长度差异的毒品原植物鉴定研究逐渐增多。
Japan（DDBJ）
the barcode of life data https://www.boldsystems.org/index.php Chen 等 [20] 发现 ITS-p3/ITS-u4 能有效区分形态相
systems（BOLD）
近的卡痛叶与团花黄梁木混合物，适用于粉末
中药材DNA条形码鉴定系 http://www.tcmbarcode.cn/china/
统（TCM-BOL） 样品的鉴定。Cheng 等 [21] 基于 ITS2 序列开展种
中国植物DNA条形码 http://dna.iflora.cn/ 属鉴定，综合使用 BLAST 比对、遗传距离计算、
数据库
系统发育树构建和二级结构分析四种方法，结果

2.1 核糖体内转录间隔区序列 一致表明 ITS2 可作为罂粟种属鉴定的可靠条
核 糖 体 内 转 录 间 隔 区 （ internal transcribed 形码。
spacer，ITS）位于核糖体 18S-5.8S-26S rDNA 顺反 2.2 rbcL 序列
子内部，是一段非编码区域，包括 ITS1、5.8S rDNA rbcL 序列位于叶绿体基因组中，编码 1,5-二