Page 69 - 《中国药科大学学报》2026年第1期

第 57 卷第 1 期 王俪颖，等：Isthmin-1 通过调控 FoxO 信号通路抑制非小细胞肺癌细胞生长的研究 63

的数据以 x± s表示，采用单因素方差分析（One-Way 理对 NSCLC 细胞生长的作用。A549 和 H1299 细
ANOVA）。用 GraphPad Prism 10 进行统计检验和 胞给予高、低两种浓度 rISM1 处理，CCK-8 检测结
作图。P<0.05 被认为具有统计学意义。 果显示，与对照组相比，0.5 μg/mL ISM1 显著抑制
细胞生长，而且 1.0 μg/mL ISM1 的抑制作用更强
3 结 果
（图 3）。结果说明，外源性给予 ISM1 可抑制 NSCLC
3.1 ISM1 在 NSCLC 组织和癌旁正常肺组织中的 细胞的生长，提示研发模拟 ISM1 的多肽，有望发挥
表达 抗肿瘤作用。
用 免 疫 组 织 化 学 染 色 （ IHC） 的 方 法 ， 检 测 3.4 rISM1 调控 FoxO 信号通路，以及细胞周期、
ISM1 在 NSCLC 组织和癌旁正常组织中的表达情 基因转录表达和脂代谢
况（图 1）。结果显示，48 例 NSCLC 中，ISM1 阳性 为了探究 ISM1 抑制 NSCLC 生长的分子作用
25 例，阴性 23 例，而 20 例癌旁正常肺组织中，ISM1 机制，本研究利用转录组测序技术，分析了 ISM1 调
阳性 16 例，阴性 4 例，ISM1 在癌组织中阳性率显 控的下游信号通路。用 1.0 μg/mL ISM1 处理 H1299
著低于癌旁组织，差异有统计学意义（χ =4.596， 细胞 24 h 后进行转录组测序，对差异表达的基因进
2
P=0.032，P<0.05）。结果表明 ISM1 在 NSCLC 中表 行 KEGG 和 GO 富集分析。KEGG 分析的结果显
达降低，提示 ISM1 可能发挥抑癌作用。 示，差异表达的基因富集于细胞周期、p53 信号通
3.2 细胞内过表达 ISM1 对非小细胞肺癌细胞生 路、泛素介导的蛋白降解，以及 FoxO 信号通路
长的抑制作用 （图 4-A）。分子功能的聚类分析（GO-MF）结果显
在 NSCLC 细胞株 A549 和 H1299 细胞中，瞬 示，差异表达的基因富集于转录因子活性的调控，
时转染编码 ISM1 的质粒和对照质粒（空载体）， 以及 RNA 多聚酶Ⅱ相关的基因转录表达（图 4-B）。
Western blot 结果证实 ISM1 质粒转染组与对照组 生物学过程的聚类分析（GO-BP）结果显示，差异表
相比，ISM1 蛋白表达明显增多（图 2-A），CCK-8 检 达的基因富集于 RNA 多聚酶Ⅱ调控的基因转录，
测结果显示 ISM1 过表达显著抑制细胞增殖，差异 胆固醇代谢，以及激素的生物合成（图 4-C）。细胞
具有统计学意义（图 2-B）。同样，在 ISM1 稳定过 内分布的聚类分析（GO-CC）结果显示，差异表达的
表达的 A549 和 H1299 细胞中，Western blot 证实 基因主要是细胞质和细胞核分布相关的基因（图 4-
ISM1 表达明显高于对照细胞（图 2-C），CCK-8 检测 D）。这些富集的信号通路，例如细胞周期的调控，
结果显示高表达 ISM1 的细胞增殖速度显著慢于对 细胞内脂代谢，p53 和 FoxO 信号通路（与细胞凋亡
照细胞，差异具有统计学意义（图 2-D）。上述结果 密切相关）等，都与既往报道的 ISM1 的功能一致。
说明 ISM1 在 NSCLC 中发挥抑癌作用。 上述结果提示 rISM1 调控细胞周期、基因的转
3.3 重组蛋白 rISM1 抑制 NSCLC 细胞的生长 录表达和脂代谢（胆固醇和激素的生物合成），相关
本研究进一步检测了给予重组蛋白 rISM1 处 细胞内信号转导通路主要是 p53 和 FoxO 信号通路。

HE ISM1 Enlarged

Normal

100 μm 100 μm 50 μm

NSCLC

100 μm 100 μm 50 μm

Figure 1 Expression of isthmin-1 (ISM1) was decreased in the tissues of non-small cell lung cancer (NSCLC) patients
IHC staining of human NSCLC tissues and normal lung tissues. Representative photos were shown