Page 87 - 《中国药科大学学报》2025年第5期
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第  56 卷第  5 期          谭玥玥，等：基于网络药理学研究藏茴香入血成分抗白癜风的作用机制                                     619

               白癜风“Vitiligo”和“Leucoderma”为关键词，通过                 3.4    关键活性化合物刺槐素对          B16F10 细胞黑色
               GeneCards、OMIM、IntAct、DisGeNET     数据库检索         素生成的影响和机制
               去除重复靶点项，获得           1 390 个疾病靶点。取人血              3.4.1 不同浓度刺槐素对          B16F10 细胞存活率的
               成分-疾病交集靶点         99 个，（图   3-A），构建   PPI 网络     影响 如图       4 所示，在    1~10 μmol/L  范围内，刺槐
               图（图    3-B）。物种设置“homo sapiens”下，利用               素作用于     B16F10 细胞    48 h，不抑制细胞存活，为
               DAVID  数据库进行      GO  基因功能富集分析，其中生               给药安全浓度。当刺槐素的浓度超过                    10 μmol/L，
               物过程    (bioprocess，BP) 相关的条目有     441 条，细胞       甚至提高至      50 μmol/L  时  B16F10 细胞存活率显著
               成 分    (cell  components， CC)59 条 ， 分 子 功 能      降低，所以，采用        1、5、10 μmol/L  为安全浓度进行
               (molicular function，MF)117 条，值得注意的是     CC  中    后续实验。
               包含特征的黑素体区域。分别选取                 BP、CC、MF   排      3.4.2 不同浓度刺槐素对黑色素含量及酪氨酸酶
               名前   5 的  GO  条目作气泡图（图       3-C），KEGG   通路      活性的影响 不同浓度刺槐素处理                   B16F10 细胞
               富集，共筛选到       158 条相关通路，38 条信号通路，主               后，黑色素相对含量明显提高，具有极显著差异。
               要包括    AGE-RAGE、Prolactin、TNF、Melanogenesis      在  10 μmol/L  浓度时，黑色素相对含量为（167.9±
               等信号通路，根据         P  等综合筛选排名前        15 的通路       10.15） %（ P<0.000 1） 。 在  1  μmol/L  时 为 （ 136.3±
               绘制气泡图进行可视化分析（图              3-D）。                8.350）%（P<0.001）。在    10 μmol/L  浓度时，刺槐素
                    将  58 个活性成分、99 个交集靶点、KEGG             信     对酪氨酸酶激活率为（166.2±5.128）%（P<0.000 1）。
               号通路根据      score 打分前   43 条通路导入      Cytoscape   活性考察均有剂量依赖性（图               5）。通过查阅文献
               3.9.1 软件构建“活性成分—靶基因—通路”网络                        得知刺槐素未见相关活性的研究报道，综合考虑酪
               （图  3-E）进行可视化分析。通过“Analyze Network”              氨 酸 酶 活 性 和 黑 色 素 含 量 实 验 结 果 ， 选 择 在
               分析网络图，degree 关联排序，得到            degree>13 的关     B16F10 细胞上研究刺槐素促进黑色素生成机制。
               键有效成分      14 个，综合排名第一的为           RX54（化合        3.4.3  刺 槐 素 对  B16F10 细 胞  TYR  相 关 蛋 白 和
               物  14）刺槐素，还包括芹菜素、山柰酚、异绿原酸                        MITF  表达的影响 通过蛋白印迹法检测不同浓度
               C  等 ， degree>13 的 关 键 通 路  14 个 ， 包 括  PI3K-    的化合物刺槐素对         B16F10 细胞酪氨酸酶家族蛋白
               AKT  信号通路、AGE-RAGE        信号通路、黑色素生              及  MITF  转录因子的表达及转录水平的影响。如
               成、脂质与动脉粥样硬化等，degree>14 的关键靶点                     图  6 所示，MITF   转录因子（P<0.001）和       TYR  蛋白
               24 个，包括    PIK3R1、AKT1、MAPK1、TNF、TYR、            （P<0.000 1）的表达水平都被明显上调，且浓度为
               CXCL8、ESR1、CASP3 等。关键通路中出现黑色                     5、10 μmol/L  时表达水平显著高于         1 μmol/L。综上
               素生成、细胞成分中出现黑素体，都是与黑色素生                           所述，刺槐素可能通过上调              MITF  和  TYR  的表达，
               成直接相关的内容。关键靶点中                 MAPK1 通过     α-   促进表皮色素细胞的黑色素生成来发挥治疗白癜
                                                       [16]
               MSH/MC1R   激活促进      TYR  表达和黑素合成 ，与             风的作用，该机制亦未见相关研究报道。
               PI3K-AKT  中关键靶点      PIK3R1、AKT1 激活可抑制
                                                                 4    讨 论
               黑素细胞凋亡，白癜风患者血清                TNF-α/CXCL8 水
               平升高 ，晚期糖基化终产物（AGEs）通过                   RAGE          藏茴香化学成分复杂，药效物质基础尚不明
                      [17]
               激 活  NF-κB， 促 进   TNF-α/IL-6 释 放 ， 加 剧  MC  损    确，所以对藏茴香药效关联的物质基础研究及作用
                 [18]
               伤 ，都在白癜风治疗作用机制中发挥关键性作                            机制研究问题亟待解决。本实验分析了藏茴香的
               用。其中      TYR  是黑色素生物合成途径中的限速                    主要化学成分及其入血成分，并结合网络药理学与
                                                   [19]
               酶，其表达水平与黑色素生成呈正相关 ，所以选                           实验验证探讨了藏茴香抗白癜风的药效物质基础
               取  TYR  作为目的基因进行相关活性研究，且网络                       和潜在作用靶点及作用机制，靶点和通路中均显示
               药 理 学 筛 选 出 的 关 键 成 分 排 名 第 一 的 化 合 物            出与黑色素生成、白癜风相关调控的基因靶点和主
                                                                                   [20]
               14（RX54，acacetin）未见相关研究报道，进一步探究                  要发病机制相关通路 。
               该化合物对      TYR  的影响。                                  为进一步探究藏茴香治疗白癜风的潜在机制，
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