Page 17 - 《渔业研究》2026年第2期
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              和强度存在显著的种间差异，这种差异与其固有的                           童，中国潍坊三通生物工程有限公司） ，实验前禁
              生理机制和生态适应性密切相关              [6-7] 。              食  24 h。宁夏大学科技伦理委员会批准同意动物实
                  鱼类缺氧不仅会影响其行为、生长和生理状                          验，批准编号为宁大伦理第            NXU-2024-149  号。
              况，通常还会导致活性氧（Reactive oxygen species，              1.2 实验方法
                           [8]
              ROS）的积累 。当         ROS  的产生超过抗氧化防御                1.2.1 低氧胁迫及取样
                                                 [9]
              时，便会触发氧化应激，导致细胞损伤 。作为应                               通过预实验测定梭鲈的低氧耐受阈值，结果显
              对策略，鱼类进化出一种由各种抗氧化酶和一些小                           示 其 浮 头  DO  阈 值 为 （ 2.0±0.1） mg/L， 窒 息 点
              的、非酶促的抗氧化分子组成的抗氧化防御系统。                           DO  阈值为（1.0±0.2）mg/L。为确保实验鱼在急性
              抗氧化酶包括谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione                      低氧暴露期间的存活率，最终实验设定                 DO  浓度为
              peroxidase，GSH-Px）、超氧化物歧化酶（Superoxide            （2.5±0.1）mg/L。实验设置对照组（8.5±0.5）mg/L
              dismutase，SOD）和过氧化氢酶（Catalase，CAT）               和低氧组（2.5±0.1）mg/L，每个处理设置              3  个生
              等和其他非酶类组成的抗氧化系统，可以削弱氧化                           物学重复，实验过程中使用溶解氧测定仪（AZ8403
              应激造成的负面影响，平衡细胞内氧化还原状态                    [10] 。  型，台湾衡欣公司）检测水体中              DO  含量。低氧实
              此外，分子水平上的反应往往更为敏感，缺氧暴露                           验通过调节氧气和氮气的注入量来控制水中的                     DO
              时，基因调控的转变可能导致转录谱的建立                      [11] 。  含量，使     DO  含量在   30 min 内从（8.5±0.5）mg/L
              缺氧诱导因子（Hypoxia-inducible factor，HIF）介            降至（2.5±0.1）mg/L    后持续    48 h；正常溶解氧恢
              导的转录激活反应是细胞感知缺氧较为关键的信号                           复实验在低氧胁迫         48 h  后立即进行，开始往水中
              转导途径之一       [12] 。因此，动态监测梭鲈（Sander              大量充入氧气，使      DO  含量快速恢复至（8.5±0.5）mg/L
              lucioperca）鳃组织在缺氧胁迫及复氧过程中发生                      后持续    6 h。实验简图见图        1。在低氧实验期间，
              的分子事件，对于深入解析梭鲈对低氧胁迫的响应                           其他水质条件保持不变。分别在低氧处理                  0 h（CG，
              至关重要。                                            对照组） 、6 h（H6） 、48 h（H48）及恢复         6 h（R6）
                  梭鲈属鲈形目（Perciformes）、鲈科（Percidae）、            时各采集    10  尾鱼，用  MS-222  溶液剂量（50.0 mg/L）
              梭鲈属（Sander） ，因其肉质细嫩、味道鲜美、营                       麻醉实验动物，解剖采集鳃组织。每组中的                   3  尾鱼
              养价值丰富，是中国重要的淡水经济鱼类之一                     [13] 。  的鳃组织用双蒸水冲洗干净后固定于                  4%  多聚甲
              同时，它也是一种缺氧敏感物种，是研究缺氧和氧                           醛，用于石蜡切片的制作。剩余鳃组织装入冻存管
              化应激的良好模型         [14] 。鳃作为鱼类最敏感的水环               后立即放入液氮中速冻，之后置于−80 ℃                  冰箱保
              境感知器官，其结构和功能的变化可直接反映鱼类                           存，用于后续生化指标和核糖核酸（Ribonucleic
              对低氧胁迫的响应        [15] 。然而，目前关于低氧胁迫对               acid，RNA）提取。
              梭鲈鳃组织影响的系统性研究，特别是涉及生化指                            1.2.2 鳃组织切片制备
              标与相关基因表达动态关联的报道仍较缺乏。基于                               鳃组织在    4%  多聚甲醛中固定       24 h，经过酒精
              此，本研究以梭鲈为研究对象，重点探讨急性低氧                           梯度脱水、二甲苯透明、石蜡包埋，用石蜡切片机
              胁迫及复氧对其鳃组织形态结构、氧化应激状态以                           切成  5 μm  厚的切片。烘干的切片脱蜡后，用苏木
              及关键低氧信号与凋亡相关基因表达的影响，旨在                           精染色，再用伊红复染，中性树胶封片后，置于光
              为阐明梭鲈应对低氧胁迫的调控机制提供基础资料。                          学显微镜下观察并拍照。每个处理组观察                   30  个左
                                                               右具有典型结构的鳃小片，使用               Image J 软件测量
               1 材料与方法
                                                               鳃小片长度（Secondary lamellar length，SLL） 、鳃
               1.1 实验材料                                        小片宽度（Secondary lamellar width，SLW）和鳃
                  实验所用梭鲈采自宁夏回族自治区水产研究所                         小片间距（Interlamellar distance，ID） 。
              （有限公司）人工繁育基地。挑取鱼体健康、规格                            1.2.3 抗氧化酶活性测定
              均匀、体长为（10.0±1.1）cm、体质量为（23.0±                        取适量解冻的鳃组织，在冰水浴条件下按体质
              2.1）g  的实验鱼共     200  尾，于循环水养殖系统中暂               量（g）∶体积（mL）=1∶9          的比例加入生理盐水，
              养  14 d。实验水温为（23±1）℃，DO          含量为（8.5±        冰水浴制备组织匀浆液，经            3 000 r/min  离心  10 min
              0.5）mg/L，pH   为（7.5±0.2） 。每天分别在       9:00  和    后取上清液备用。根据南京建成生物工程研究所相
              16:00  按照  3%  鱼体质量投喂商品化颗粒饲料（海                   关试剂盒的操作步骤测定鳃组织中               GSH-Px、SOD、
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