Page 18 - 《渔业研究》2026年第2期

第 2 期 苑晓乐等： 急性低氧胁迫和复氧对梭鲈鳃组织氧化应激和细胞凋亡的影响 161

CAT 活性和丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量。 acid，cDNA） 。使用 Premier 5.0 软件设计特定的
1.2.4 RNA 提取和实时荧光定量聚合酶链式反 引物对，内参基因选用 Gapdh（表 1） 。qRT-PCR
®
应（Quantitative real-time polymerase chain reac- （Light Cycler 96 qRT-PCR 仪，Roche）反应体系
tion，qRT -PCR） 为正、反向引物各 0.5 μL，Mix 10.0 μL，ddH O
2
采用 TRIzol 试剂提取鳃组织的总 RNA，经 8.0 μL，模板 cDNA 1.0 μL，总体积为 20.0 μL。反
1.0% 琼脂糖凝胶电泳确定 RNA 的完整性，使用 应条件为 95 ℃ 预变性 30 s；95 ℃ 变性 5 s，60 ℃
NanoDrop 分光光度计检测其浓度和质量。随后根 退火 30 s，40 个循环；然后 95 ℃，5 s，65 ℃ 1 min；
据反转录试剂盒步骤，将提取的 RNA 反转录成互补 最后 50 ℃，30 s 降温。使用 2 −ΔΔCt 公式计算基因的
脱 氧 核 糖 核 酸 （ Complementary deoxyribonucleic 相对表达量。

① 关闭循环水 溶解氧测定仪
Shut off the circulating water DO meter

氧气 Oxygen
③ 调节氧气、氮气的注入量
氮气 Nitrogen 以维持 DO 含量
Adjust the amount of oxygen
and nitrogen injected to
maintain the DO content

蓄水池
Reservoirs ② 塑料膜隔绝空气
Plastic film blocks air
图 1 缺氧应激实验的简图
Fig. 1 A brief diagram of the hypoxia stress experiment

表 1 引物序列信息
Tab. 1 Information of primers
引物 登录号 引物序列（5’—3’ ） 产物长度/bp
Primers Accession no. Primer sequence (5’—3’ ) Product length
F: TGGAAGTAGGAGCCGTTTTG
Bax XM_031312263 109
R: TTCTTGTGGTTTGGGTCGC
F: AGCGTGATGGACGAGGTGT
Bcl-2 XM_031279352 115
R: TCTGCGATGCGGGAAAC
F: GACTTGGAGACCCGTGGAA
Caspase9 MW113741 99
R: GGCTGTATCTGAACTGCTGGA
F: CCGCAGAAAGAAGTGGAGC
Hif-1a MZ553920 187
R: TGAAGCAGGAACTGACGACC
F: AGTTGCCCCGCTTATGGT
Egln-2 XM_031296704 109
R: TGTGCGTTGTGCTGGTTAGTA
F: GGCGTCAACCACGAGAAGT
Gapdh XM_031299603 219
R: ACCAGTAGAGGCGGGAATG

1.3 数据分析 2 结果
实 验 结 果 数 据 用 平 均 值 ±标 准 差 （ Mean±
SD）表示，利用 SPSS 25.0 软件单因素方差分析 2.1 低氧、复氧对梭鲈鳃组织结构的影响
（One-way ANOVA）进行检验，并采用 Tukey 多 梭鲈鳃小片在正常状态下排列紧密，完整对称
重比较检验数据差异的显著性，P<0.05 表示差异 地向两侧伸展，线粒体丰富细胞（Mitchondria-rich
显著。 cells，MRC）呈椭圆形并分布在鳃小片基底部。