Page 76 - 《渔业研究》2026年第1期

第 1 期 吴琮琮等： 紫海胆地中海弧菌病病原鉴定及致病机理研究 73

[4]
以上 。中间球海胆是一种冷水性海胆，养殖区域 活力强的个体，运回实验室后暂养 7 d，暂养水温
集中在中国黄海、渤海，无法在南方海域度夏，这 为 26 ℃，待稳定后用于后续试验。福建省水产研
限制其在南方海域的大规模推广养殖 [5-6] 。南方海 究所科技伦理（审查）委员会批准动物实验，批准
域急需开发新的海胆种类，而紫海胆是一种适宜中 编号为 FRIF21-2503-02。
[7]
国南方海域养殖的海胆新对象 ，其海胆黄的收获 1.2 病原菌的分离纯化及形态学观察
季节在晚春初夏，可与中间球海胆上市形成天然互 选取具有明显溃疡症状和脱刺现象的患病紫海
补，不仅填补海胆黄供给的空白期，而且在全球变 胆，先用灭菌生理盐水清洗海胆体表，然后在无菌
暖的大趋势下，其具有更好的环境适应性，发展潜 操作条件下，用灭菌环从患病紫海胆病灶处取样，
力巨大。目前，福建海胆黄年产量约 8 t，需要从 将样品划线或涂布接种至硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐
近 120 t 野生海胆中获得，采捕区域主要集中在东 蔗糖（Thiosulfate citrate bile salts sucrose，TCBS）
山海域，但野生捕捞的紫海胆性腺指数低，海胆黄
琼脂培养基和 2216E 培养基上，置于 28 ℃ 培养箱
质量差。在生产实践上，广泛采用暂养催肥技术提
培养 24~48 h 后，从培养基上挑取单菌落，经多次
高紫海胆性腺指数，并提升其性腺品质。2024 年—
分离纯化，获得单一菌株（编号为 HD4） 。肉眼
2025 年，福建省不同课题组通过研发海胆配方饵
观察病原菌 HD4 在不同培养基的菌落特征，采用
料，为其提供更为全面的营养，将紫海胆性腺颜色
扫描电子显微镜观察菌株形态特征。将分离纯化后
从白色提升至橘黄色，性腺指数提升 1 倍，显著提
的病原菌 HD4 菌落接种于 2216E 液体培养基中，
高了紫海胆的产量和经济价值。同时，在福建龙海
用甘油生理盐水（20%）将其保存于−80 ℃ 冰箱
市、霞浦县、连江县和东山县合作培育了共计超
中，备用。
过 300×10 粒的紫海胆苗种，目前生长良好，预计
4
1.3 人工回归感染试验
4
能带来 1 000×10 元以上的经济产值。未来预计每
选取健康紫海胆，随机分组，每组 10 头。在
年人工养殖海胆产量可在 3 000 t 以上，全产业链
整个试验期间，除不投喂饵料外，其他养殖条件保
可提升经济产值超 10 亿元。然而，紫海胆在养殖
持一致。攻毒用菌株为患病紫海胆病灶中分离到的
期间容易发生病害，已构成影响其催肥养殖发展的
病原菌 HD4，将病原菌 HD4 经活化、扩大培养及
主要制约因素，成为亟待解决的技术瓶颈。因此，
离心处理后，用磷酸盐缓冲溶液（Phosphate buffer
深入探究紫海胆催肥暂养期病害发生的流行病学特
saline，PBS）重悬，然后将菌悬液梯度稀释至 10 ~
5
征、致病机制及防控技术，对于推动紫海胆产业可
10 CFU/mL，于 4℃ 条件下保存备用。
9
持续发展具有重要的理论与实践意义。
人工回归感染试验采用腹腔注射方法。试验组
2024 年夏季，福建东山某养殖场催肥暂养的
8
7
5
9
紫海胆发生大面积病害，发病个体症状为初期厌 共设 5 组，按 10 、10 、10 、10 和 6 10 CFU/mL
食、反应迟缓、附着力下降，且棘刺脱落严重；随 菌悬液浓度分别注射紫海胆腹腔，每头注射剂量
着病情的发展，海胆壳出现溃疡、褪色及秃刺，最 为 200 μL；对照组 1 组，注射同剂量的灭菌生理盐
后空壳死亡。本研究现场采集患病海胆，对病原菌 水。试验期间不进行投喂，水温为 25 ℃，盐度为
进行分离纯化，通过形态学、人工回归感染、生理 30，连续充气，观察 7 d 以上。采用改良寇氏法 [8]
生化特征和系统发育分析鉴定和描述病原菌，并对 计算病原菌对紫海胆的半数致死浓度（Median
该菌株进行基因组测序分析，以全面解析致病菌毒 lethal dose，LD ） ，同时对濒死的患病海胆进行
50
力基因，以及开展药物敏感性试验，探究该菌株的 病原菌重分离及鉴定。
科学防控措施。该研究旨在为福建紫海胆的健康催 1.4 菌株生理生化分析
[9]
肥暂养和疾病防治提供参考依据。 根据《伯杰氏鉴定细菌学手册》 、 《常见细
菌系统鉴定手册》 [10] 及使用 Biolog 自动微生物鉴
1 试验材料与方法
定系统对病原菌的生理生化指标进行鉴定分析。
1.1 试验对象 1.5 16S rDNA 基因序列分析
患病紫海胆，取自福建省东山县某催肥暂养海胆 根据上海捷瑞生物工程有限公司的细菌基因组
养殖场，体质量为 20~25 g，平均体质量为（22±3）g。 脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic acid，DNA）提取
人工感染试验的健康紫海胆，取自集美大学，体质 试剂盒说明书提取病原菌 HD4 基因组 DNA。聚合
量为 10~15 g，平均体质量为（12±3）g。选取健壮、 酶链式反应（Polymerase chain reaction，PCR）体