Page 20 - 《渔业研究》2025年第6期
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第 6 期                       何    丽等： 养殖对虾疾病防控技术研究进展                                    711

              这两种技术均具有快速、灵敏、操作简便的特点，                           发现，RPA    技术最低可检测单个拷贝的病原，且
              尤其适用于养殖场现场诊断、出入境检疫和苗种筛                           可同时检测对虾急性肝胰腺坏死弧菌（Vibrio para-
              查。研究报道表明，LAMP            技术可在     60 min  内完     haemolyticus  causing  acute  hepatopancreatic  necrosis
              成对   WSSV  核酸的扩增，通过肉眼观察反应管中                      disease， VAHPND） 、 WSSV、 IHHNV、 EHP       等
              颜色变化即可判断样品是否感染               WSSV，且其检测           多种病原，为对虾疾病的早期诊断提供了有力的技
              限可达    10 拷贝/μL，灵敏度高于常规           PCR [68] 。但    术支撑   [69] 。但是该技术在应用中存在一定的局
              LAMP  技术因高灵敏度、易受感染而会出现假阳性                        限：一方面，引物设计需严格优化，以避免非特异
              结果，因此需严格操作规范。此外，另有研究报道                           性扩增；另一方面，商业化试剂盒的价格相对较高。


                                                 表 2    对虾病原性疾病检测标准
                                     Tab. 2    Detection standards for pathogenic diseases in shrimp
                          病原性疾病                                   检测标准                            方法
                        Pathogenic diseases                    Detection standards               Methods
                                              GB/T 28630.2—2012《白斑综合征（WSD）诊断规程 第 2 部分：
               白斑综合征                          套式 PCR 检测法》                                    套式 PCR
               White spot disease (WSD)
                                              2023  版世界动物卫生组织《 水生动物疾病诊断手册》                   qPCR
               急性肝胰腺坏死病                       SC/T 7233—2020《急性肝胰腺坏死病诊断规程》                   套式  PCR  或  qPCR
               Acute hepatopancreatic necrosis disease
               十足目虹彩病毒病                       SC/T 7237—2020《虾虹彩病毒病诊断规程》                     套式  PCR
               Decapod iridescent virus 1
               黄头病                            SC/T 7236—2020《对虾黄头病诊断规程》                      套式  RT-PCR
               Yellow head disease
               桃拉综合征                          GB/T 40257—2021《桃拉综合征诊断规程 RT-PCR  检测法》
               Taura syndrome                                                                RT-PCR
               偷死野田村病毒病                       SC/T 7238—2020《对虾偷死野田村病毒（CMNV）检测方法》            套式  RT-PCR  或
               Viral covert mortality disease                                                qPCR
                                              GB/T 25878—2010《对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）
               传染性皮下和造血组织坏死病                  检测 PCR 法》                                      常规  PCR
               Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis
                                              2021  版世界动物卫生组织《水生动物疾病诊断手册》                    qPCR
               虾肝肠胞虫病                         SC/T 7232—2020《虾肝肠胞虫病诊断规程》                     套式  PCR  或  qPCR
               Enterocytozoon hepatopenaei infection

               2.2.3 基因芯片技术                                    存在目标病原时，病原抗原与试纸条上的特异性抗
                  基因芯片技术作为一种高通量检测平台，在对                         体结合，形成抗原−抗体−胶体金复合物，出现肉
              虾病原体检测方面展现出显著的优势                  [70] 。该技术      眼可见的显色条带        [73] 。已有研究表明，免疫胶体
              基于核酸杂交原理，将大量已知序列的核酸探针固                           金技术可运用于对虾         VAHPND   [74] 、EHP [75]  等疾病
              定在芯片表面，与样本中的核酸进行杂交，通过检                           的检测。该技术操作简便、快速（10~15 min） ，无
              测杂交信号，可同时对多种病原进行高通量筛查与                           需专业仪器设备，适合现场快速检测；但其检测灵
              鉴定  [71] 。研究表明，基因芯片技术能够同时检测                      敏度低于分子检测技术，且易因交叉污染问题而导
              13  种细菌病原体和      11  种病毒病原体     [72] 。基因芯片       致假阳性结果；此外，检测效果的稳定性和准确性
              技术的应用将极大提高检测效率，适用于养殖对虾                           依赖抗体的质量水平。
              中多种病原体的常规监测。但该技术的实际应用仍                            2.3.2 ELISA  技术
              存在一定的局限：芯片制备成本较高，限制了其大                               ELISA  技术是基于抗原−抗体反应，结合酶的
              规模推广应用；在检测灵敏度方面，其表现不及                            催化作用，通过酶促反应显色程度判断样本中病原
              qPCR；操作过程需依赖专业设备和具备专业技能                          含量。ELISA    技术也可用于对虾病原检测，如针对
              的技术人员，对实验条件要求较高。                                 虾类病毒所设计的单克隆抗体可通过                  ELISA  被用
               2.3 免疫学检测技术                                     于检测    WSSV、YHV、IMNV       等 [76] 。这种检测方
               2.3.1 免疫胶体金技术                                   法的检测限可达        pg  级，具有无需实验室设备及专
                  免疫胶体金技术以胶体金作为示踪标记物，利                         业技能，且能够实现批量样本高效分析的显著优
              用抗原−抗体特异性结合原理进行检测。当样本中                           势。但该技术自动化程序有限、检测耗时相对较
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