Page 19 - 《渔业研究》2025年第6期
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这些固着类纤毛虫能够通过透明的柄附着在凡纳滨 应（Polymerase chain reaction，PCR） 、实时荧光
对虾的幼体上，当大量寄生时，则会影响虾体的呼 定量 PCR（Quantitative real-time PCR，qPCR）和
吸、摄食、游泳和蜕壳，严重时可引起虾体大量死 环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplifi-
亡，给养殖生产带来严重损失 [66] 。 cation，LAMP）]、免疫学技术 [ 如酶联免疫吸附
试验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）
2 对虾病原检测技术
和免疫胶体金技术 ] 以及新兴技术（如纳米技术和
对虾病原检测技术是防控病害的核心手段，通 生物传感器）等。各种检测方法各具特色，能够满
过快速、准确识别病原，可为病害预警、精准防治 足不同场景下的检测需求，但也存在各自的局限性
和健康养殖提供关键依据。现有对虾病原检测技术 （表 1） 。因此，在实际应用中，需要根据检测目
主要包括传统方法（如临床症状观察、显微镜检查 的、样本类型、预算成本以及对时效性和准确性的
和病原培养） 、分子生物学方法 [ 如聚合酶链式反 要求，选择最适合的检测方法。
表 1 对虾病原检测技术
Tab. 1 Pathogen detection technologies in shrimp
检测技术 主要方法 适用场景 优点 缺点
Detection technologies Main methods Applicable scenario Advantages Disadvantages
传统检测 显微镜检查、病原培养 养殖场初步筛查 操作简单、成本低廉、 灵敏度低、耗时长
Traditional detection 无需复杂设备
常规 PCR、套式 PCR、
qPCR 实验室检测 灵敏度高、特异性强 需专业设备、检测成本较高
分子生物学检测
Molecular biology LAMP 养殖场 恒温操作、肉眼判读结果 引物设计复杂、易污染、假阳
detection 性风险高
高通量检测、特异性强、 成本高、操作复杂、灵敏度低
基因芯片 实验室检测
多病原筛查 于 qPCR
免疫学检测 ELISA、免疫胶体金 依赖抗体质量、灵敏度低于
Immunological detection 现场快速筛查 快速、操作简便 PCR
新兴检测 纳米技术、生物传感器 养殖场现场检测 快速、便携式设备、 稳定性有待提升、技术成熟度
New detection 灵敏度接近 PCR 较低
2.1 传统检测技术 PCR、套式 PCR、逆转录 PCR（Reverse transcrip-
传统的病原检测主要依赖于临床表现观察和组 tion，RT-PCR）和 qPCR 等分子检测技术已被确立
织病理学诊断。在临床诊断方面，通过系统地观察 为病原检测的权威标准方法（表 2） ，这些标准化
患病对虾的行为学变化（如摄食、游动等） 、体表 技术手段为对虾疫病的精准防控提供了强有力的技
特征（如体色变化、甲壳病变等）和解剖病变（如 术支撑与科学保障。其中，常规 PCR 具有操作简
肝胰腺、鳃、肌肉等）进行初步判断，并通过组织 便、成本较低的优势，但灵敏度不及套式 PCR 和
切片染色，在显微镜下观察特征性的组织病理变化 qPCR，因此通常适用于病原的初步筛查场景；套
和病原体形态特征 [53] 。此外，还可对病原进行分离 式 PCR 以高灵敏度为核心特点，能够精准检测低
培养与鉴定，从病虾组织取样，接种到选择性培养 载量病原，但操作流程相对复杂，且在操作过程中
基或细胞系上，分离培养细菌、病毒、真菌等病原， 存在交叉污染的潜在风险；而 qPCR 不仅具备极高
最后通过形态学、生理生化试验等进行鉴定 [45] 。但 的灵敏度，还可实现病原的定量分析，同时其自动
传统检测技术无法精准鉴定病原种类，且耗时长。 化程度高，能有效降低污染风险，但该技术对设备
2.2 分子生物学检测技术 的要求较高，相应成本也更为昂贵。
2.2.1 PCR 技术 2.2.2 等温扩增技术
PCR 技术是对虾病原检测的常用方法，其原 与传统 PCR 技术依赖热循环扩增不同，等温
理是通过引物与病原核酸特定序列结合，在 DNA 扩增技术通过模拟体内 DNA 复制过程，在 60~65 ℃
聚合酶作用下扩增目标核酸片段，从而实现病原检 恒温条件下即可在短时间内实现目标核酸的指数级
测。根据技术原理和应用特点，PCR 技术主要分 扩增。目前，在对虾病原检测中应用较为成熟的等
为常规 PCR、套式 PCR、qPCR 以及多重 PCR [67] 。 温扩增技术包括 LAMP 和重组酶聚合酶扩增技术
目前，在中国水生动物疫病监测体系中，常规 （Recombinase polymerase amplification，RPA）等。
