Page 113 - 《渔业研究》2025年第6期

804 渔 业 研 究 第 47 卷

为中国四大养殖贝类之一，菲律宾蛤仔是单种养殖 了它们之间的遗传分化程度，旨在为菲律宾蛤仔遗
产量最高的贝类，目前中国菲律宾蛤仔的养殖产量 传多样性保护、资源管理和良种选育等工作提供重要
[1]
占世界的 80% 以上，年产量可达到 300 多万 t 。 依据。
近几十年来，菲律宾蛤仔已经形成了“南苗北养”
1 材料与方法
的模式，目前每年约 90% 的苗种是在福建省培育
的。作为中国菲律宾蛤仔苗种的核心产区，福建省 1.1 样品采集与测序
的苗种基地不仅为全国养殖业提供了大量的苗种资 随机采集 162 个菲律宾蛤仔个体，其中 67 个养
源，还承担着推动产业技术升级和可持续发展的重 殖个体分别来自福建云霄（Yunxiao，YX）的养殖场
任。但是，在实际生产中，许多育苗场使用的菲律 （37 个）和东山（Dongshan，DS）的垦区（30 个），
宾蛤仔亲本来自养殖群体，未经科学选种。因此， 2 个养殖群体的亲本都是经过多年累代养殖的个体；
菲律宾蛤仔的养殖产业也面临着诸多问题，如苗种 95 个野生个体分别从中国的山东莱州湾国家生态
供应不足、病害频发和种质资源退化等。为了保护 保护区（Laizhou，LZ，15 个）、朝鲜的南浦（Nanpu，
这一优质养殖品种，应高度重视福建省菲律宾蛤仔 NP，40 个）和海州（Haeju，HJ，40 个）采集。
苗种养殖产业的发展。 取约 100 mg 菲律宾蛤仔闭壳肌肌肉，充分剪
自菲律宾蛤仔开展人工繁育以来，科技人员已 碎，用 E.Z.N.A.软体动物 DNA 提取试剂盒（美国
对其开展了大量的研究。其中，在种群遗传学方 欧米嘉生物科技有限公司）提取全基因组。线粒
面，主要集中于菲律宾蛤仔野生群体资源的调 体 COⅠ扩增基因引物 LCO1490（5’-GGTCAACA-
查 [2-3] ，但在比较菲律宾蛤仔的养殖与野生群体的 AATCATAAAGATATTGG-3’）和 HCO2198（5’-A-
遗传多样性和群体结构变异方面的相关报道较少， AACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3 ’） [9] 由 深
仅 Xing 等 [4] 采用微卫星分子标记技术分析了 4 个 圳华大基因科技有限公司合成。实验中的聚合酶链
菲律宾蛤仔野生群体和 2 个中国北方养殖群体的遗 式反应（Polymerase chain reaction，PCR）体系为：
传分化；聂鸿涛等 [5] 利用微卫星标记比较了大连 2.5 mmol/L 氯化镁（MgCl ） ，2.5 mmol/L 脱氧核
2
人工选育群体和野生群体的遗传多样性。21 世纪 糖核苷三磷酸（Deoxy-ribonucleoside triphosphate，
初，菲律宾蛤仔高效的人工育苗技术在福建省成功 dNTPs），正、反向引物各 20 pmol，1 U Ex Taq DNA
研发，不同于以往的养殖方法，其培育的幼虫是在 Polymerase，2 μL 脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic
几千亩的水泥堤坝围成的海边垦区养成的。在生产 acid，DNA）模板溶液，用超纯水补充至 25 μL。
时，亲本的投放量超过 2 000 kg/hm ，这基本等同 PCR 扩增反应程序为：预变性 94 °C 2 min；94 °C
2
于自然繁殖条件下的亲本量。目前，这种养殖方法 30 s，48 °C 30 s，72 °C 1 min，循环 35 次；总延
已经实施了近 20 年。但是，迄今还没有关于福建 伸 72 °C 5 min。PCR 扩增产物经 1.5% 琼脂糖电泳
菲律宾蛤仔养殖群体遗传多样性和群体结构信息的 凝胶纯化后在 ABI 3730 XL（Applied Biosystems，
研究报道。 USA）自动测序仪上用 LCO1490 进行测序。福建
线粒体 DNA（Mitochondrial DNA，mtDNA） 省水产研究所科技伦理（审查）委员会批准动物实
为母性遗传，比多数单拷贝的核基因拥有更高的 验，批准编号为 FRIF251001。
序列变异。线粒体细胞色素 c 氧化酶第Ⅰ亚基 1.2 数据分析
（Cytochrome c oxidase subunit Ⅰ，COⅠ）是海洋 DNA 序列结果由 Dnastar 软件（DNASTAR Inc.，
无脊椎动物线粒体基因组中较为保守的蛋白质编 Madison，USA） [10] 采用默认参数对位，并进一步
码基因之一。作为一种分子标记，它已经成功被 经人工校对。对位后，将碱基序列输入 DnaSP 5 软
应用于许多水生脊椎动物和无脊椎动物的群体遗 件 [11] 进行各群体单倍型的统计，以及对核苷酸多
传分析中，包括翘嘴鲌（Culter alburnus） 、罗 样性指数（π） 、单倍型多样性指数（Hd） 、平均
[6]
氏 沼 虾 （ Macrobrachium rosenbergii） [7] 和 须 鲫 核苷酸差异数（k）等遗传多样性参数进行计算；
（Carassioides cantonensis Heincke） [8] 等。本研究 采用 Mega 11 软件 [12] 的最大似然法（Maximum
采用线粒体 COⅠ基因标记评估了来自中 2 个养殖 likelihood，ML）构建系统发育树，并基于 K-2-P
群体（中国福建）和 3 个野生群体（中国莱州、朝 模型分别采用邻接法（Neighbour-joining，NJ） 、
鲜南浦和海州）的遗传多样性和群体结构，并对比 非 加 权 组 平 均 法 （ Unweighted pair-group method