Page 99 - 《渔业研究》2025年第5期

渔业研究 2025，47（5） ：640 − 650 http://www.hyyysci.com
Journal of Fisheries Research DOI:10.14012/j.jfr.2025075

穆志新，廖 凯，张卫卫，等. 大牡蛎弧菌 S2 胶原酶基因的克隆、表达及其对菲律宾蛤仔基因表达的调控[J]. 渔业研究，2025，47（5） ：640 − 650.
Mu Z X， Liao K， Zhang W， et al. Cloning and expression of the collagenase gene from Vibrio crassostreae S2 and its regulation on gene
expression in Manila clam Ruditapes philippinarum[J]. Journal of Fisheries Research，2025，47（5） ：640 − 650.

大牡蛎弧菌 S2 胶原酶基因的克隆、表达及其

对菲律宾蛤仔基因表达的调控

穆志新，廖 凯，张卫卫 ，徐继林 *
*
（宁波大学海洋学院，浙江 宁波 315832）

摘要：【目的】菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum）是中国重要的水产养殖贝类，然而细
菌性疾病频发严重制约其育苗产业发展。大牡蛎弧菌（Vibrio crassostreae）S2 是菲律宾蛤仔
育苗过程中重要的病原菌，本研究旨在鉴定大牡蛎弧菌 S2 的致病因子，并筛选可抑制致病
因子的物质。【方法】设计引物进行聚合酶链式反应（PCR）克隆基因，并将基因重组至表
达载体 pET28-a(+) 中，转入表达菌株大肠杆菌（Escherichia coli）BL21(DE3)，经表达、复
性与纯化获得重组胶原酶（rCol ） 。通过注射实验分析 rCol V c 致病性，利用转录组分析胶
Vc
原酶对菲律宾蛤仔基因表达的调控作用。最后以胶原酶活性为指标，筛选对胶原酶具有抑制
活性的小分子药物。【结果】大牡蛎弧菌 S2 胶原酶基因 col 编码含有 277 个氨基酸的蛋白
c
V
质。表达菌株 BL21/pET28col 可大量表达胶原酶，纯化了重组的蛋白酶，将 rCol V c 注射至
c
V
菲律宾蛤仔中可导致 20% 的菲律宾蛤仔死亡。胶原酶注射菲律宾蛤仔后，导致 132 个基因
差异表达，下调的差异表达基因显著富集于 DNA 重组、DNA 整合、DNA 代谢等生物学过
程，以及肌动蛋白结合、细胞骨架蛋白结合等分子结合功能。KEGG 富集分析表明，胶原酶
组菲律宾蛤仔中下调的差异表达基因主要富集于肌动蛋白细胞骨架调控通路，提示胶原酶在
弧菌致病中起重要作用。核黄素、姜黄素、原花青素、盐酸巴马汀、2’-羟基查尔酮、氯己定和
苯扎氯铵均对 rCol V c 产生抑制作用。【意义】本研究首次揭示了大牡蛎弧菌 S2 胶原酶对菲
律宾蛤仔的致病性及基因表达的调控作用，并为其育苗过程中弧菌病的防控提供了潜在靶位点。
关键词：菲律宾蛤仔；大牡蛎弧菌；胶原酶；基因表达
中图分类号：S917.4 文献标识码：A 文章编号：2096 − 9848 （2025） 05 − 0640 − 11

菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum）属于帘 损失，成为水产养殖业发展的瓶颈 [4] 。弧菌属
蛤科（Veneridae） 、花蛤属（Ruditapes） ，是四大 （Vibrio）细菌是最为常见的贝类致病菌，如灿烂
传统养殖贝类之一，在水产养殖业中具有重要的地 弧 菌 （ V. splendidus） 、 大 牡 蛎 弧 菌 （ V. crasso-
位，是中国重要的养殖品种 [1-3] 。近年来，随着水 streae）和塔斯曼尼亚弧菌（V. tasmaniensis） ，可
产养殖业的蓬勃发展，各种细菌性病害导致菲律 感 染 太 平 洋 牡 蛎 （ Crassostrea gigas） 和 扇 贝

宾蛤仔大规模死亡，对贝类养殖造成了严重的经济 （Pecten maximus）等贝类的幼虫 [5] ；河口弧菌

收稿日期：2025-07-21 修回日期：2025-09-17
基金项目：国家重点研发计划项目（2024YFD2401700） ；国家现代农业产业技术体系（CARS-49）
第一作者：穆志新 ，男，硕士研究生，研究方向为贝类病原菌致病机制。E-mail: muzhixin233@163.com
通信作者：张卫卫，女，研究员，研究方向为水产动物病原学。E-mail: zhangweiwei1@nbu.edu.cn
徐继林，男，研究员，研究方向为养殖生态学。E-mail: xujilin@nbu.edu.cn
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