Page 149 - 《渔业研究》2025年第5期

690 渔 业 研 究 第 47 卷

a) M 1 2 3 b) M 1 2 3 4 5 6 7 8
长度/bp 长度/bp
Length Length

500
400
300 500
200 400
300
150
100 200
150
50 100
50

图 9 HRCA 技术对实际样本检测（a）及其灵敏度（b）
Fig. 9 Detection of HRCA on actual samples (a) and its sensitivity (b)
注：a. HRCA 技术对实际样本的检测（M：DL 500 DNA Marker；泳道 1：M. bicuspidate 菌株 DNA；泳道 2：病蟹肝胰
腺 DNA；泳道 3：阴性） 。b. HRCA 对实际样本检测的灵敏度（M：DL 500 DNA Marker；泳道 1： 4.13×10 pg/μL；泳道 2：
3
−2
4.13×10 pg/μL；泳道 3：4.13×10 pg/μL；泳道 4：4.13×10 pg/μL；泳道 5：4.13×10 pg/μL；泳道 6：4.13×10 pg/μL；泳道
1
0
−1
2
−3
7：4.13×10 pg/μL；泳道 8：阴性） 。
Notes: a. Detection of actual samples by HRCA (M: DL 500 DNA Marker; Lane 1: M. bicuspidate strain DNA; Lane 2: Diseased
E. sinensis hepatopancreas DNA; Lane 3: Negative). b. Sensitivity of HRCA to actual sample detection (M: DL 500 DNA Marker;
0
−1
3
2
1
Lane 1: 4.13×10 pg/μL; Lane 2: 4.13×10 pg/μL; Lane 3: 4.13×10 pg/μL; Lane 4: 4.13×10 pg/μL; Lane 5: 4.13×10 pg/μL; Lane
−2
−3
6: 4.13×10 pg/μL; Lane 7: 4.13×10 pg/μL; Lane 8: Negative).

a) b) c)
8.0 36 R =0.997 2 50 000
2
荧光信号的标准化增量 ΔR n 5.0 循环阈值 Ct 30 归一化荧光报告基团的一阶导数 Derivative reporter (-Rn) 30 000
34
7.0
y=−3.436 13x+38.119 90
32
40 000
6.0
28
26
4.0
20 000
24
3.2
22
10 000
2.0
1.0
18
16
0 1 2 3 4 5 6 7 8 20 9 000
2 6 10 14 18 22 26 30 34 38 1 2 3 4 5 6 60 65 70 75 80 85 90 95
循环 Cycles 浓度/（pg/μL）Concentration 温度/℃ Temperature
图 10 qPCR 技术对实际样本检测
Fig. 10 qPCR technology for actual sample detection
2
3
−1
0
1
注：a. qPCR 扩增曲线（1~7：中华绒螯蟹肝胰腺 DNA 浓度分别为 4.13×10 、4.13×10 、4.13×10 、4.13×10 、4.13×10 、
−3
−2
4.13×10 、4.13×10 pg/μL；8：ddH 2 O） ；b. 标准曲线；c. qPCR 熔解曲线。
3
Notes: a. qPCR amplification curve (1−7: DNA concentrations in the hepatopancreas of E. sinensis are 4.13×10 , 4.13×10 , 2
−2
1
−1
0
−3
4.13×10 , 4.13×10 , 4.13×10 , 4.13×10 , and 4.13×10 pg/μL, respectively; 8: ddH 2 O); b. Standard curve; c. Fluorescence
quantitative PCR melting curve.

表 5 两种检测技术对中华绒螯蟹肝胰腺实际样本的 样本来源多样、不受样品加工和外形变化影响、不
检出率比较 受生物样品变性影响、能够对病原菌灭活后安全检
Tab. 5 Comparative detection rates of two assay 测等 [27] 。这对于阐明该病的传播途径、为制定准
techniques for actual hepatopancreas samples 确的防控措施提供依据具有重要意义。目前已有学
from E. sinensis
者基于二尖梅奇酵母 26S rDNA 和 5.8S ITS rDNA
检测技术 检出率/%
Detection methods Detection rate 基因建立了中华绒螯蟹“牛奶病”PCR 检测技
超分支滚环扩增 56.25 术 [4, 11] 。Xing 等 [13] 建立了以线粒体色素 c 氧化酶
HRCA
亚基 VIA（COX 6A）为靶标的 qPCR 技术，对二
实时荧光定量 PCR 56.25
qPCR 尖梅奇酵母的检测灵敏度为 7.6×10 拷贝/µL。Liu
1