Page 140 - 《渔业研究》2025年第5期

渔业研究 2025，47（5） ：681 − 694 http://www.hyyysci.com
Journal of Fisheries Research DOI:10.14012/j.jfr.2025051

魏 华，赵清如，谭雅冰，等. 基于超分支滚环扩增技术对中华绒螯蟹“牛奶病”病原二尖梅奇酵母的高灵敏检测[J]. 渔业研究，2025，
47（5） ：681 − 694.
Wei H，Zhao Q R，Tan Y B，et al. Detection of Metschnikowia bicuspidate based on hyper-branched rolling circle amplification in the mitten
crab (Eriocheir sinensis)[J]. Journal of Fisheries Research，2025，47（5） ：681 − 694.

基于超分支滚环扩增技术对中华绒螯蟹

“牛奶病”病原二尖梅奇酵母的高灵敏检测

魏 华 ，赵清如 ，谭雅冰 ，李金玲 ，孙 昕 ，
1,2
1,2
1,2
1,2
1,2
赵莹莹 ，李应东 ，孙 娜 ，李晓东 1,2,3*
1,2
1,2
2,3
（1. 沈阳农业大学动物科学与医学学院，东北畜禽疫病研究教育部重点实验室，辽宁 沈阳 110866；
2. 盘锦光合蟹业有限公司，农业农村部中华绒螯蟹育种与繁养重点实验室，辽宁 盘锦 124000；
3. 盘锦光合蟹业有限公司，辽宁 盘锦 124000）
摘要：【背景】二尖梅奇酵母（Metschnikowia bicuspidate）是中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）
“牛奶病”的病原之一，严重阻碍着中华绒螯蟹养殖业的发展。目前尚无有效治疗“牛奶病”
的药物，快速、高效、准确的病原诊断是其防控的关键。相比传统的病原分离培养技术，聚
合酶链式反应（PCR）等分子生物学技术已能够实现二尖梅奇酵母的安全快速检测，但仍需
要复杂的变温设备，难以进行池边检测。【目的】建立一种基于超分支滚环扩增（HRCA）
技术检测二尖梅奇酵母的新方法，为池边检测酵母菌病原提供新思路。【方法】本研究基于
二尖梅奇酵母 26S rRNA 基因（U44822）序列，设计出特异性高的锁式探针（PLP）和引
物，建立 HRCA 技术，并对该方法的灵敏度、特异性、重复性和应用效果进行了评价。
【结果】HRCA 最佳反应体系为 PLP 浓度 1 μmol/L、扩增时间 20 min、扩增温度 63 ℃、Bst
DNA 聚合酶浓度 2 U/mL。该方法对标准品的检测范围为 0.50~1 000 fmol/L，具有较高的种
属间特异性，可以实现单碱基错配识别，且重复性与稳定性良好。在实际样本检测中，该方
法对中华绒螯蟹二尖梅奇酵母肝胰腺 DNA 的检测灵敏度为 4.13×10 pg/μL，对随机抽取的
1
中华绒螯蟹二尖梅奇酵母检出率为 56.25%，与实时荧光定量 PCR（qPCR）方法检测结果一
致。【结论】本文建立的 HRCA 技术可以在恒温条件下高效、快速、灵敏、特异地检测出中
华绒螯蟹“牛奶病”病原二尖梅奇酵母，适用于池边检测。本研究结果不仅为酵母菌病原的
检测提供一种新手段，也为该病的早期诊断和预防提供新的技术支撑，在水产病原诊断领域
具有很大的应用潜力。
关键词：超分支滚环扩增（HRCA）技术；二尖梅奇酵母；中华绒螯蟹；牛奶病
中图分类号：S945 文献标识码：A 文章编号：2096 − 9848 （2025） 05 − 0681 − 14

中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis） ，又称河蟹， 中华绒螯蟹的养殖规模不断扩大，导致多种病害发
以其丰富的营养价值和鲜美的口感，深受全国人民 生，其中“牛奶病”是近年来引起中华绒螯蟹经济
[2]
的喜爱，是中国重要的养殖经济甲壳类动物之一 。 损失的疾病之一 。自 2019 年以来，多个中华绒
[1]

收稿日期：2025-04-25 修回日期：2025-06-30
基金项目：国家重点研发计划（2023YFD2401802） ；国家虾蟹产业技术体系建设项目（CARS-48） ；辽宁省应用基础研究计划项目
（2023JH2/101300129）
第一作者：魏 华，女，副教授，研究方向为水产动物病害防控。E-mail: hwei@syau.edu.cn
通信作者：李晓东，男，教授，研究方向为水产动物育种与健康养殖技术。E-mail: lxd001@ceraap.com
©《渔业研究》编辑部。本文为使用 CC BY-NC-ND 4.0 许可协议的开放获取作品。
© Editorial Office of Journal of Fisheries Research. This is an open access article under the CC BY-NC-ND 4.0 license.