Page 206 - 《水产学报》2026年第2期

2 期 水 产 学 报 50 卷

口黑鲈养殖密度的增加及养殖环境的恶化，导致 1 材料与方法
大口黑鲈发病率逐年上升，给大口黑鲈养殖业造
成了重大经济损失。细菌性疾病是引起大口黑鲈 1.1 主要材料
发病的主要原因之一，国内已报道的细菌性疾病
患病大口黑鲈采自荆州市荆州区太湖港管理
包括嗜水气单胞菌 (Aeromonas hydrophila)、鰤诺 区某养殖场，体长 (12.5±1.5) cm，体重 (20.4±4.8) g，
卡氏菌 (Nocardia seriolae)、鳗弧菌 (Vibrio anguil- 患病个体反应迟钝，体表出血和溃疡，肝脏、脾
larum)、爱德华氏菌 (Edwardsiella spp.) 等 [3-6] 。 脏、肾脏等部位有大量白色结节出现。健康大口
诺卡氏菌属于放线菌目 (Actinomycetales) 诺 黑鲈购自同一个养殖场，规格与自然发病大口黑
卡氏菌科 (Nocardiaceae) 诺卡氏菌属 (Nocardia)， 鲈相近，对大口黑鲈形态、活力检测后进行回归
兼性胞内寄生革兰氏阳性菌，是一种条件致病菌， 感染实验。本研究获得了长江大学实验动物管理
[7]
广泛存在于土壤和水中 。能侵害鱼类的诺卡氏 和使用伦理委员会批准，实验过程中操作人员严
菌有鰤诺卡氏菌、星状诺卡氏菌 (N. asteroids)、 格遵守长江大学伦理规范，并按照长江大学伦理
杀鲑诺卡氏菌 (N. salmonicida) 和牡蛎诺卡氏菌 委员会制定的规章制度执行。
(N. crassostreae) [8-9] 。 鰤 诺 卡 氏 菌 是 水 产 养 殖 动 脑心浸出液肉汤 (BHI)、脑心浸液琼脂 (BHIA)
物感染诺卡氏菌病的主要病原 [10] 。研究发现， 和革兰氏染色试剂盒 (青岛海博生物技术有限公
鰤诺卡氏菌可感染多种水产养殖动物，如大口 司)；细菌微量生化管 (杭州滨和微生物试剂有限
黑鲈、乌鳢 (Channa argus)、大黄鱼 (Larimichthys 公司)；PCR 相关试剂 (北京全式金生物技术有限
crocea)、五条鰤(Seriola quinqueradiata)、卵形鲳 公司)；实验引物 [ 生工生物工程 (上海) 股份有限公
鲹 (Trachinotus ovatus) 等 [11-15] 。水产养殖动物感染 司 ]；药物敏感纸片 (杭州微生物试剂有限公司)。
鰤诺卡氏菌主要症状表现为鱼体表面出血、皮肤
1.2 病原检测
溃疡，解剖后内脏器官表面会有大量结节。该病
选取患病严重的大口黑鲈，检查记录外观症
发病周期长、治愈率低、死亡率高，发病初期主
状；用 75% 乙醇棉球对体表进行擦拭消毒后，于
要在内脏器官不易被察觉，常造成鱼体大面积死
无菌环境下解剖，取皮肤溃疡处组织、脾脏、肝
亡，给水产养殖业带来巨大的经济损失 。
[16]
脏和肾脏等病变组织 (约 150 mg) 放入无酶的 1.5 mL
病原菌全基因组测序 (whole genome sequen-
EP 管中进行研磨，用细菌基因组提取试剂盒提取
cing，WGS) 是基于病原菌的整个基因组进行分型
DNA，以提取的细菌组 DNA 为病原检测的模板；
的方法，也是了解其生物特征的重要工具，还可
合成大口黑鲈常见病害特异性引物(表 1)，反应体
以通过比较基因组方法对不同菌株的进行进化和
系 (20 μL)：模板 1 μL、2×Taq PCR Master Mix 酶
溯源分析，也能通过分析基因组中的毒力基因和
10 μL、上下游引物 (10 μmol/L) 各0.5 μL、ddH O
耐药基因来预测菌株的潜在致病性 。本研究从 2
[17]
8 μL；扩增条件：预变性 95 ℃ 3 min，95 ℃ 变性
患病大口黑鲈出现白色结节的脏器中分离到 1 株
10 s，55 ℃ 退火 10 s，72 ℃ 延伸 1 min，30 个循
优势菌，结合菌落形态、革兰氏染色、生理生化
环，72 ℃ 延伸 10 min。
特征、16S rRNA 和 secA1 基因序列分析等方法进
行鉴定。对分离菌株进行全基因组测序分析，将 1.3 病原菌分离培养及生理生化鉴定
分离菌株的全基因组与 NCBI 数据库已报道的鰤 于无菌条件下利用接种环在皮肤溃疡处、脾
诺卡氏菌的全基因组进行比较学分析，了解分离 脏、肝脏和肾脏组织进行取样，并接种于 BHI 固
菌株与其他鰤诺卡氏菌之间的进化关系。对分离 体培养基，28 ℃ 恒温培养 5 d，挑取形态一致单
菌株进行回归感染实验和组织病理分析、毒力基 菌落进行纯化培养。
因筛查，了解该菌株的致病性；对分离菌株的生 参考《常见细菌系统鉴定手册》中具体鉴定
物被膜形成能力和耐药基因进行检测，分析该菌 方法 ，将分离菌株接种于细菌微量生化鉴定管，
[18]
株的耐药性，并筛选分离菌株敏感的抗生素。本 以鰤诺卡氏菌菌株 SD1810 作为对照 [19] ，测定分
研究为深入研究诺卡氏菌致病机制及耐药机理提 离菌株的酶类产生、水解活性、单碳源生长利用
供理论依据和数据支持。 等理化性质。

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