Page 206 - 《水产学报》2025年第11期

2025, 49(11): 119417 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA

DOI: 10.11964/jfc.20240914710

基于 RPA-CRISPR/Cas12a 的沙氏弧菌可视
化检测方法的建立

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葛 辉 ， 巫旗生 ， 宁 岳 ， 冯君雅 ， 陈昊翔 ， 李慧耀 ， 第一作者：葛辉，从事海洋经济动物
养殖技术、疾病防控及免疫学相关研
叶 军 ， 吴丽云 ， 温 凭 ， 徐春燕 ， 任 磊 2* 究，E-mail：717764449@qq.com
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1. 福建省水产研究所，福建省海洋生物增养殖与高值化利用重点实验室，福建 厦
门 361013；2. 厦门大学材料学院，福建 厦门 361005

摘要：
【目的】建立基于 RPA-CRISPR/Cas12a 的沙氏弧菌实时荧光检测法和
试纸条检测法，满足牡蛎新发病原沙氏弧菌的快速检测需求。

【方法】实验针对沙氏弧菌 toxR 基因设计特异性片段，优选 RPA 引物 通信作者：任磊，从事体外诊断相关
和 crRNA 序列，确保基因标志物的准确扩增与识别；当 CRISPR/Cas12a 的纳米生物技术、基于病毒样颗粒的
肿瘤免疫治疗和新型抗菌材料等相关
系统识别到 RPA 扩增的病原靶标基因并激活其反式切割活性后，生物 研究，E-mail：renlei@xmu.edu.cn

素修饰的单链 DNA 荧光探针作为报告分子被切割，分别依据蓝光下 资助项目：国家贝类产业技术体系
(CARS-49)；国家海洋水产种质资源库
的荧光强度和试纸条的显色情况判定检测结果；实验采用多种弧菌验 (2024)；福建省海洋服务与渔业高质量
发展专项(FJHY-YYKJ-2024-1-13)；福
证检测方法的特异性，并通过不同浓度沙氏弧菌菌液评估 2 种检测方
建省属公益类科研院所基本科研专项
法的灵敏度；最终将 2 种检测方法与 PCR 方法进行真实样本检测对比。 (2022R1013007)；2025年度海洋与渔
业综合服务专项 (FYZF-KTYJ-2025-10)
【结果】本研究成功建立了 RPA-CRISPR/Cas12a 荧光检测法和试纸检
收稿日期：2024-09-30
测法，且均表现出优异的特异性，可准确识别沙氏弧菌，整个检测流 修回日期：2025-03-10

程可在 1 h 内完成；2 种方法的检测限均达到 100 CFU/mL，检测结果 文章编号：
与 PCR 高度一致 (符合率 100%）。 1000-0615(2025)11-119417-13
中图分类号：S 942.2
【结论】本研究开发的基于 RPA-CRISPR/Cas12a 的荧光检测法和试纸 文献标志码：A

检测法，突破了传统方法的局限，显著缩短检测时间，且无需复杂仪 作者声明本文无利益冲突

器，操作简便，为沙氏弧菌的现场快速检测提供了可靠的技术支持。 © 《水产学报》编辑部(CC BY-NC-ND 4.0)
Copyright © Editorial Office of Journal of
本研究为沙氏弧菌的快速检测提供了高效、便捷的新方法，对水产养 Fisheries of China (CC BY-NC-ND 4.0)

殖病害防控和食品安全保障具有重要意义。
关键词: 沙氏弧菌；重组酶聚合酶扩增 (RPA)；CRISPR/Cas12a；荧光
检测；试纸检测

在水产养殖过程中，细菌性和病毒性疾病会引起严重的生产和经
济损失，在这些致病菌中，弧菌属 (Vibrio) 细菌是最常见的致病因子
之一。弧菌是革兰氏阴性细菌，形态呈直杆状或弯曲状，无芽孢，在
水环境中通常通过单个极性鞭毛运动，具有嗜温性和化学有机营养性，
代谢方式为兼性发酵，广泛分布于河口、海洋、沿海水域以及水产养
殖环境中 [1-2] 。作为水产养殖中的重要病原体，弧菌属的某些种类已
被证实对养殖鱼类、贝类和虾类具有强致病性 [3-4] 。副溶血性弧菌

中国水产学会主办 sponsored by China Society of Fisheries https://www.china-fishery.cn
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