Page 31 - 《水产学报》2025年第6期
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雷丽娜，等                                                                 水产学报, 2025, 49(6): 069403

              4  个  C  区及  C-末端序列，且      C  区含有   4  个糖基       因在健康中国花鲈的肝脏、脾脏、头肾、肠道、
              化位点    NGT、NAS、NKT       和  NAT(图  1-a)。氨基       鳃、脑、皮肤和肌肉           (白肌) 这   8  种组织中均有
              酸多序列比对发现，中国花鲈                 IgMH  同大多数         表达   (图  6)。其中   IgMH  的  mRNA  的表达水平
              鲈形目鱼类具有相同结构组成，V                 区均含有     4  个    在脾脏中最高，在头肾和鳃中表达量较高，在
              FR  区  (FR1-4) 和  3  个  CDR  区  (CDR1-3)(图  2-a)；  脑、肠道、皮肤和肝脏中表达量较低                  (图  6-a)。
              C  区有  9  个保守的半胱氨酸位点和             8  个保守的        MHCⅡ β 的   mRNA   在鳃中表达量最高，在脾脏
              色氨酸位点，形成          4  个二硫键盐桥      (图  2-b)。对      和头肾中表达量较高，在脑、肌肉、肝脏、肠
              IgMH  的  C  区进行基因结构分析发现，中国花                      道和皮肤中表达量较低            (图  6-b)。

              鲈  IgMH  基因   C  区部分包含     4  个外显子和      3  个    2.4    LPS、Poly (I:C) 刺激及细菌人工感染后
              内含子，与人         (Homo sapiens)、小鼠   (Mus mus-     的  IgMH  和  MHCII β mRNA   表达结果
              culus) 和斑马鱼的一致       (图  3-a)。
                                                                   相较于对照组，LPS          刺激组中国花鲈的鳃
                   中 国 花 鲈   MHCⅡβ 的    cDNA  全 长 序 列 为
              1 242 bp，3'-和  5'-UTR  长度分别为    463  和  29 bp，   组织   IgMH  的  mRNA  表达水平呈现先下调后上
                                                               调的趋势，在第         6 小时显著下调，在           12~48 h
              750 bp  的  ORF  编码  249  个氨基酸，氨基酸序列              上调，第        小时极显著上调；在头肾组织中，
              由先导肽      (信号肽的一种)LP、胞外结构域、                               72
                                                               第  6  小时上调，第      12  和 24  小时与对照组无显
              TM/CY  跨膜区和胞质区组成，蛋白质结构域预
                                                               著差异，第      48  小时显著下调，第          72 h  恢复到
              测显示该蛋白质包括             MHCⅡβ   结构域和      IGc1
              结构域    (图  1-b)。氨基酸多序列比对显示，中国                    正常水平；在脾脏中，第            24  小时出现显著上调，
                                                               第  48  小时与对照组表达水平相近，在刺激后
              花鲈   MHCⅡ β   与其他硬骨鱼类具有高度的相似
              性和结构特点：具有           4  个保守的半胱氨酸位点，               第  72  小 时 又 呈 显 著 上 调   (图  7-a)。 中 国 花 鲈
              分别位于      β domain  和  Ig domain  中，各自形成         MHCⅡ β 的   mRNA   表达水平在鳃组织中仅在
              一个键内二硫键         (图  2-c)。基因结构预测分析发               第  12  小时显著下调，在其他时间点无明显变化；
              现，中国花鲈        MHCⅡ β 含   6  个外显子和     5  个内      在头肾组织中，第          6  小时出现极显著上调，第
              含子，与鮸和小鼠的            MHCⅡ β 基因结构一致，              12  和  24  小时与对照组无显著差异，在第              48  小
              但不同于人和斑马鱼的基因结构                 (图  3-b)。         时显著下调，第        72  小时则恢复到正常水平；在

                                                               脾脏组织中，刺激后第            6  小时无显著变化，第
              2.2    中国花鲈   IgMH  和  MHCII β  的系统发育树
                                                               24  和  48  小时显著下调，第       72  小时其表达量升
                   通过   Novopro (https://www.novopro.cn/tools/  高，但与对照组差异不显著             (图  7-b)。
              ident_sim.html) 对中国花鲈     IgMH  氨基酸进行序               在迟缓爱德华氏菌人工感染组中，中国花
              列分析。结果显示，中国花鲈                 IgMH  恒定区与         鲈鳃、头肾和脾脏中           IgMH  的  mRNA  水平在第
              同科中的鳜       IgMH  恒定区一致性为         60.8%，相        6~24  小时整体高于对照组水平，呈现显著或极
              似性为    75.6%(表  2)。MHCⅡ β    与黄金鲈 (Perca         显著上调；在       48 h  时，头肾和脾脏中表达量恢
              flavescens) (XP_028420408.1) 的氨基酸一致性高            复正常水平，而鳃组织中表达量仍显著上调
              达  81.53%。应用     MEGA 5.0  软件采用邻近法所              (图  8-a)。在鳃、脾脏和头肾中        MHCⅡ β 的    mRNA
              构建的硬骨鱼类免疫球蛋白重链系统发育树显                             表达量总体上呈先上调后下调的趋势；在鳃中，
              示，中国花鲈        IgMH  与其他硬骨鱼        IgMH  聚为       第  6  小时显著上调，第        12  和  24  小时与对照组
              一支，并与鲈形目鮨科中的斜带石斑鱼和鳜聚                             无明显差异，至第         48  小时表达水平下调；在头
              为一分支，自举支持率为              74%(图  4)。MHCⅡ β        肾中，6~24 h    显著上调，第       48  小时恢复至正常
              的系统发育树显示，中国花鲈                MHCⅡ β   首先与        水平；在脾脏中，第            6  和  12  小时显著上调，
              斜带石斑鱼聚为一支，自举支持率为                    96%，再        第  24  小时恢复至正常水平，在第             48  小时其表
              与大黄鱼、鮸、赤点石斑鱼                (E. akaara)聚为一       达量低于对照组，但差异不显著                (图  8-b)。此外，
              簇，自举支持率为          84%(图  5)。                     在迟缓爱德华氏菌感染            48 h  后，发现感染组中

                                                               的中国花鲈出现死亡，鳍条基部出血，解剖后
              2.3    组织表达结果
                                                               发现其肝脏发白，脾脏和肾脏肿大。
                   RT-qPCR  结果显示，IgMH        和  MHCⅡ β 基           Poly (I:C) 刺激组中，中国花鲈鳃组织中

              中国水产学会主办  sponsored by China Society of Fisheries                          https://www.china-fishery.cn
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