Page 28 - 《水产学报》2025年第6期

雷丽娜，等 水产学报, 2025, 49(6): 069403

活补体、凝集抗原和调理细胞毒作用等多种功 miiuy) 、真鲷 (Pagrosomus major) 和欧洲舌齿
[24]
能 [5-6] 。硬骨鱼类 IgM 以两种形式存在：分泌型 鲈 [25] 等鱼类。
的四聚体和作为 B 细胞表面受体 (BCR) 的膜结 中国花鲈分布于中国、朝鲜和日本沿海及
[7]
合型单体 。IgM 重链 (IgM heavy chain，IgMH) 河口水域，属广盐性鱼类，在其人工繁殖等苗
的结构包含可变区 (variable region，V 区) 和恒 种繁育技术突破之后，中国花鲈海水网箱、滩
定区 (constant region，C 区)，可变区又分为骨 涂池塘和淡水池塘养殖等模式全面发展，工厂
架区 (framework region, FR) 和互补决定区 (com- 化和深远海养殖也在兴起 [26-27] 。随着养殖规模
plementtarity determining region, CDR) 两 部 分 ， 扩大，中国花鲈病害愈加频发，造成巨大的经
其中在骨架区中有与免疫球蛋白进行结构折叠 济损失 。解析中国花鲈适应性免疫相关基因
[28]
相关的保守区域 [7-8] 。迄今已报道的鱼类 IgMH 的表达调控机制，发展中国花鲈病害的免疫防
[9]
基因包括鳜 (Siniperca chuatsi) 、斜带石斑鱼 控技术已成为当务之急。因此，本研究首次克
[10]
(Epinephelus coioides) 、尼罗罗非鱼 (Oreochro- 隆鉴定了中国花鲈 IgMH 和 MHCII β 基因；检
mis niloticus) 、 日 本 花 鲈 (Lateolabrax japoni- 测了细菌人工感染以及细菌和病毒类似物刺激
[8]
cus) 、欧洲舌齿鲈 (Dicentrarchus labrax) [12] 和 后，中国花鲈 IgMH 和 MHCII β 基因在 mRNA
[11]
大 口 黑 鲈 (Micropterus salmoides) [13] 等 鲈 形 目 水平的表达情况；进一步原核表达并纯化了中
(Perciformes) 鱼类，斑马鱼 (Danio rerio) 、鲤 国花鲈 IgMH 和 MHCⅡ β 的重组蛋白，制备了
[14]
(Cyprinus carpio)、团头鲂 (Megalobrama ambly- 抗中国花鲈 IgM 的多克隆抗体，拟为深入探究
cephala) 和 草 鱼 (Ctenopharyngodon idella) [15] 等 中国花鲈抗菌和抗病毒免疫应答机制奠定基础。

鲤科 (Cypriniformes) 鱼类，以及虹鳟 (Oncorhyn-
[16]
chus mykiss) 、斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)、 1 材料与方法
黄颡鱼 (Pelteobagrus fulvidraco) [17] 和牙鲆 (Para-
1.1 实验用鱼
lichthys olivaceus) 等。值得注意的是，刘悦等 [11]
报道了“L. japonicus”(文中中文学名“日本花鲈”) 实验所用中国花鲈购买自杭州萧山萧湘水
IgMH 序列，但 L. japonicus 被认为是中国花鲈 产养殖场，平均体长 (20 ± 5) cm，体重 (200 ±
(L. maculatus) 的同物异名 [18] ，Lateolabrax 隶属 50) g，实验鱼暂养 1 周 [ 水温：(24 ± 1) °C] 后
鲈形目鮨科 (Serraninae)。研究收集所有已报道 选择健康鱼进行后续实验。本研究获得了上海
的鲈形目鱼类 IgMH 序列，并对其恒定区进行 海洋大学实验动物管理和使用伦理委员会批准
多序列比对和序列一致性分析，发现刘悦等 [11] (DW-2019-012)，实验过程中操作人员严格遵守
报道的“L. japonicus”隶属太阳鱼科 (Centrarchi- 上海海洋大学伦理规范，并按照上海海洋大学
dae)，而非隶属花鲈所在的鮨科，推测其为大 伦理委员会制定的规章制度执行。

口黑鲈的一个地方群体。由此可见，中国花鲈
1.2 cDNA 全长序列克隆
IgMH 基因有待鉴定。
随机选取 3 尾鱼进行解剖。取鳃、肠道、
主要组织相容性复合体 (major histocompat-
ibility complex class, MHC) 是另外一类关键的适 肝脏、脾脏、头肾等组织，通过 TRIzol (Invitro-
应性免疫分子，具有丰富的多态性，在诱导和 gen，美国) 法提取各组织总 RNA，并使用 Nan-
调节适应性免疫反应方面起重要作用 。脊椎 odrop 2000c 超 微 量 分 光 光 度 计 (Thermo Sci-
[19]
动物中存在 3 类 MHC 分子，其中 MHC Ⅱ类分 entific，美国) 测定 RNA 样品浓度和质量。以
子是由 α 和 β 两个亚基组成的异源二聚体，主 组织总 RNA为模板，使用 SMART RACE cDNA
要分布在巨噬细胞、B 细胞和内皮细胞等表面， amplification kit (TaKaRa，日本) 根据其使用说
起到抗原呈递作用。鱼类 MHC Ⅱ类分子的基 明制备用于 cDNA 末端快速扩增 (RACE-PCR)
因克隆鉴定及其多态性研究主要涉及斑马鱼、 的 cDNA模板。
半滑舌鳎 (Cynoglossus semilaevis)、牙鲆 [20] 和西 利用 Local Blast 软件分析中国花鲈基因
伯利亚鲟 (Acipenser baerii) [21] 以及尼罗罗非鱼 、 组 数 据 库 并 得 到 IgMH 和 MHCⅡ β 的 部 分
[22]
[23]
大 黄 鱼 (Larimichthys crocea) 、 鮸 (Miichthys cDNA 序列，设计中间片段引物 IgM-F/IgM-R
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