Page 54 - 《水产学报》2025年第5期
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陈涵，等                                                                  水产学报, 2025, 49(5): 059605

              (Epinephelelus malabaricus) 对盐度变化具有很强            完 整 的 中 华 绒 螯 蟹 作 为 实 验 用 蟹 ， 体 重 为
              的适应能力，不仅能在海水中养殖而且也可在                             (54.48±7.01) g。实验开始前在玻璃水缸中暂养，
              河口及低盐地区进行养殖。郝俊等 在天津地                             暂养期间每日早晚投喂中华绒螯蟹专用饲料，
                                                [7]
              区 推 广 盐 碱 水 凡 纳 滨 对 虾        (Litopenaeus  van-  投喂量为蟹体重的          5%，持续充氧，每日换水
              namei) 健康养殖技术。王慧等 研究表明中国                         1/2，每日吸污      1  次。实验全程采用充分曝气的
                                           [8]
              明对虾    (Fenneropenaeus chinensis) 可移植到内陆         自来水，水温为         (22±1) °C，pH  为  7.8。实验前
              咸水水域进行养殖。杨富亿等 研究表明凡纳                             1  天停止投喂。本研究获得了中国水产科学研
                                           [9]
              滨对虾可在吉林省西部             32 mmol/L  的盐碱水中          究院淡水渔业研究中心实验动物管理和使用伦
              养殖。方伟等      [10]  研究表明盐碱水养殖拟穴青蟹         (Scy-    理委员会批准，实验过程中操作人员严格遵守
              lla paramamosain) 的生长速率、肥满度、氨基                   中国水产科学研究院淡水渔业研究中心伦理规
              酸和脂肪酸含量与正常海水养殖相比无显著差异。                           范，并按照中国水产科学研究院淡水渔业研究
                   碱度作为盐碱水养殖过程中重要水质参数，                         中心伦理委员会制定的规章制度执行。

              对水产动物生长发育、生理代谢、组织功能等                             1.2    实验设计与样品采集
              方面有着重要影响 。现今已有一些甲壳动物
                                [11]
              碱度胁迫研究报道，如张秀红等 研究表明脊                                 正式实验时挑选规格基本一致的健康中
                                             [1]
              尾白虾     (Exopalaemon carinicauda) 可以在低于    8     华绒螯蟹     120  只，设立对照组和碱度组，每组
              mmol/L  的碳酸盐碱度中生长发育，但高碳酸盐                        设定  3  个平行，每个平行放养           20  只。碱度组添
              碱度可能会造成脊尾白虾鳃和肝胰腺组织损伤，                            加  NaHCO ，达到碱度       60 mmol/L，实验期间不
                                                                        3
              导致其生长受到影响。房文红等                  [12]  研究表明，      投喂饲料。在碱度胁迫             0、6、12    和  24 h  时，
              随着碱度、pH       的升高，中国明对虾幼虾的存活                     各胁迫时间点每组采集             3只蟹的肝胰腺组织，
              率下降。柳飞等         [13]  研究表明随着碱度的升高，               迅速置于液氮冷冻，于−80 °C            冰箱备用，测定
              脊尾白虾的抱卵率、孵化率和幼体成活率都会                             抗应激关键调控基因的表达。采集各组蟹的肝
              降低。魏威等       [14]  研究表明在碳酸盐碱度胁迫下，
                                                               胰腺组织，迅速置于冰上保存，于−20 °C                  冰箱
              中国明对虾中        Fc ATG5  基因表达量均有所升高，
                                                               备用，测定抗氧化酶活性。采集胁迫                     0  和  6 h
              在碱度胁迫后        12 h  达到最高。
                                                               蟹的步足肌肉组织，用            Bouin  氏液固定，制作
                   中 华 绒 螯 蟹    (Eriocheir sinensis) 属 十 足 目
                                                               苏木精伊红      (H.E) 染色石蜡切片。
              (Decapoda) 方 蟹 科   (Grapsidae) 绒 螯 蟹 属  (Erio-
              cheir)，因其味道鲜美、营养丰富而深受人们的                         1.3    抗应激及发育关键调控基因表达的测定
              喜爱，是我国重要的经济水产动物 。目前有                                 用  RNAiso plus 试剂  [ 宝日医生物技术      (北京)
                                                [15]
              关碳酸盐碱度对中华绒螯蟹的影响研究较少，                             有限公司     ] 提取中华绒螯蟹肝胰腺总             RNA。提
              仅见有关中华绒螯蟹盐碱耐受性及盐碱胁迫对
                                                               取的   RNA  使用超微量分光光度计 NanoPhoto-
              其渗透调控关键组织的影响研究                [15-16] 。
                                                               meter N50 (IMPLEN，德国) 测量吸光度         OD 260/280
                   本研究开展了       24 h  急性碱度胁迫对中华绒               的比值及                        0  比值均为
              螯蟹抗应激及发育关键调控基因                   mTOR、AKT                 RNA  浓度，OD     260/28         1.80~
                                                               2.00，RNA  可用于    cDNA  反转录反应。
              表达、抗氧化酶       CAT  活性以及抗氧化指标         T-AOC、
                                                                   cDNA  的合成按照       PrimeScript TM  RT reagent
              MDA   和能量代谢关键组织            (肝胰腺) 的影响研
                                                               Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)[ 宝日医
              究，旨在探讨中华绒螯蟹应对碱度胁迫的应答
                                                               生物技术     (北京) 有限公司       ] 说明书进行两步反
              机制，为今后进一步揭示盐碱条件下中华绒螯
              蟹机体调控机制提供理论参考。                                   应：首先去除基因组             DNA，反应体系：5 ×

                                                               gDNA  Eraser  Buffer  2.0  μL、 gDNA  Eraser  1.0
              1    材料与方法                                       μＬ、Total RNA 1 μL、补     RNA Free dH O 2  至  10
                                                               μL，反应条件为        42 °C 2 min，然后进行反转录

              1.1    实验对象
                                                               反应，反应体系：PrimeScript RT Enzyme Mix I
                   实验所用中华绒螯蟹来自江苏好润集团河                          1.0 μL、RT Primer Mix 1.0 μL、5 × PrimeScript
              蟹养殖基地，选取体质健壮、规格整齐、附肢                             Buffer  2  (for  Real  Time)  4.0  μL、 RNase  Free

              https://www.china-fishery.cn                           中国水产学会主办    sponsored by China Society of Fisheries
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