Page 95 - 《中国药科大学学报》2025年第5期

第 56 卷第 5 期 更 桑，等：基于网络药理学探究藏药佐汤卡擦丸治疗高血压的药理作用机制 627

24 h。梯度乙醇脱水后对组织进行石蜡包埋，切成 志性成分进行分析：鸭嘴花考林酮碱、鸭嘴花酮碱
3 μm 薄片后置于载玻片上，60℃ 烘箱烤化后取出 是鸭嘴花标志性成分，其 degree 值分别为 59、39；
常温保存备用。石蜡切片用二甲苯和梯度酒精脱 木犀草素是洪连的主要成分之一，degree 值为 79；
蜡至水，用柠檬酸缓冲液进行抗原修复并洗涤，放 异紫堇球碱、碎叶紫堇碱、金黄紫堇碱是矮紫堇的
入 3% 过氧化氢溶液中室温避光孵育 15 min 以阻 标志性成分，其 degree 值分别为 79、73、72，其他成
断内源性过氧化物酶。洗涤后滴加 5% 山羊血清封 分也有较高的 degree 值，说明矮紫堇在高血压治疗
闭 30 min，轻轻甩掉封闭液后在切片上滴加一抗并 中可能发挥主要作用；秦皮乙素、文冠木素、表儿茶
平放于湿盒内 4℃ 孵育过夜。洗涤后滴加荧光二 素是生等的标志性成分，其 degree 值分别为 54、
抗， 37℃ 避光孵育 40 min。洗涤后滴加 DAPI 染 30、26；甘草素、白藜芦醇、异甘草素是锦鸡儿的标
液，室温避光孵育 10 min。洗涤后用抗荧光淬灭封 志性成分，其 degree 值分别为 77、60、56；鞣花酸、
片剂封片，于荧光显微镜下观察并采集图像。 没食子酸是余甘子的标志性成分，其 degree 值分别
2.12 蛋白质免疫印迹（Western blot） 为 50、25；3-甲氧基大叶茜草素、大叶茜草素、二氢
收集给药 12 周后 WKY 组、SHR 组和 SHR+ 大叶茜草素是茜草的标志性成分，其 degree 值分别
ZTKCW-H 组大鼠的心脏组织，用 RIPA 裂解液、 为 78、54、49；crocusatins B、crocusatins C、西红花
PMSF 溶液和磷酸酶抑制剂混合物提取心脏组织蛋 苦苷是番红花的标志性成分，其 degree 值分别为
白，取适量蛋白原液用 BCA 试剂盒测定蛋白浓度， 52、50、40。综上所述，鸭嘴花考林酮碱、木犀草
其他蛋白溶液加入蛋白上样缓冲液后沸水浴 10 素、异紫堇球碱、秦皮乙素、甘草素、鞣花酸、3-甲
min。将蛋白样本进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺 氧基大叶茜草素和 crocusatins B 被认为是佐汤卡擦
凝胶（SDS-PAGE）电泳和转膜后用 5% 脱脂奶粉或 丸的标志性核心成分。
5%BSA 溶液（磷酸化蛋白）室温封闭 2 h。含吐温- 3.2 ZTKCW 治疗高血压的核心靶点筛选
20 的 Tris 盐缓冲液（TBST）洗涤后加入对应一抗， 将 518 个交集基因导入 String 数据库获得了
4℃ 孵育过夜，后加入二抗，室温孵育 2 h，滴加 相应的 PPI 网络并在 Cytoscape 中进行绘图（图 2）
ECL 溶液后进行曝光显影。 和网络拓扑分析，以 degree > 67 为标准筛选出
2.13 数据处理与分析 106 个核心靶点和 GAPDH、AKT1、TNF、IL6、SRC、
使用 GraphPad Prism 9.5 进行统计学分析，多 EGFR、STAT3、BCL2 等 8 个关键靶点。
组间比较采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）。 3.3 核心靶点的 GO 和 KEGG 通路富集分析
P<0.05 被认为具有统计学差异。 对 106 个核心靶点进行 GO 和 KEGG 通路富
集分析。GO 功能分析显示，这些靶点主要参与细
3 结 果
胞迁移、细胞对激素的反应、细胞对脂质的反应、
3.1 ZTKCW 治疗高血压的核心成分和靶点的收集 平滑肌细胞的增殖、磷代谢和凋亡信号通路调控等
共收集 ZTKCW 128 个成分，通过 SwissADME 生物过程（图 3-A），具有蛋白激酶、蛋白丝氨酸/苏
筛选出 68 个活性成分，利用 SwissTargetPrediction 氨酸激酶、非跨膜蛋白酪氨酸激酶活性，以及与激
和 TCMSP 预测靶点，经汇总去重共获得 788 个药 酶、蛋白质结构域、转录因子、泛素样蛋白连接酶、
物活性成分靶点。通过 GeneCards 和 OMIM 数据 磷酸酶结合的分子功能（图 3-B），主要位于膜筏、细
库收集高血压靶点，汇总去重后共获得 5 406 个靶 胞质核周区、谷氨酸能突触、受体、囊泡腔和转录
点。对上述药物靶点和疾病靶点取交集并绘制韦 调节复合物等成分中（图 3-C）。KEGG 通路富集分
恩图，共有 518 个药物疾病交集靶点（图 1-A）。 析显示，核心靶点主要涉及脂质与动脉粥样硬化、
在 Cytoscape 中绘制了复方-有效成分-靶点-疾 JAK/STAT、 糖 尿 病 心 肌 病 、 核 因 子 κB（ nuclear
病网络图（图 1-B），图中共有 594 个节点，3 089 条 factor kappa-B，NF-κB）等信号通路（图 3-D）。将排
边，通过网络拓扑分析获得藏药各活性成分的 名前 20 的富集通路和相应靶点在 Cytoscape 中绘
degree 值（补充材料表 1），其中槲皮素、异鼠李素、 制成靶点-通路网络图（图 3-E），共 110 个节点，
汉黄芩素、山柰酚等中药常见成分具有较高的 350 条边，其中涉及 PIK3CA、PIK3R1、MAPK8 和
degree 值，分别为 84、82、82、81。对各药物中的标 AKT1 等靶点的通路较多。