Page 29 - 《渔业研究》2026年第2期

172 渔 业 研 究 第 48 卷

冻；对照组（Ae-CK）与各运输时间组（Ae-T）同 物种间高度保守，PSI-BLAST 中 600 余个序列相
步取样。当所有样品取样完毕后，统一置于−80 ℃ 似度均在 93% 以上。系统发育进化树结果如图 2
冰箱内保存备用。 所示，辐鳍鱼类聚为一大分支，亲缘关系较近；哺

表 2 大眼双锯鱼模拟运输试验安排 乳动物、鸟类、爬行动物、两栖动物聚为另一大分
Tab. 2 Arrangement of A. ephippium simulation 支，与辐鳍鱼类亲缘关系较远；辐鳍鱼类中，同目
transportation experiment 鱼类分别聚为一支，其中眼斑双锯鱼与大眼双锯鱼
关系最近。
时间段 Time period
组别
Groups 2.2 HSPA8 蛋白理化性质预测
0~6 h 7~12 h 13~24 h 25~36 h 37~48 h
对大眼双锯鱼 HSPA8 蛋白的理化性质进行
Ae-T0 打包后立即取样
分析，结果表明，HSPA8 蛋白的分子式为 C 3117 H 5001
Ae-T6 不间断运输 S ，预测的分子量大小约为 71.26 kDa，
N 863 O 1005 19
Ae-T12 不间断运输 不间断运输 理论等电点为 5.22。在组成蛋白质的 20 种常见氨
静息 1 h、 基酸中，含量最多的是甘氨酸（Gly） ，占比为 8.6%；
Ae-T24 不间断运输 不间断运输 运输 1 h， 不间断运输
循环 其次是赖氨酸（Lys） ，占比为 8.0%；含量最少的
静息 1 h、 静息 1 h、 是色氨酸（Trp） ，仅占 0.3%；该蛋白中不含稀有
Ae-T48 不间断运输 不间断运输 运输 1 h， 不间断运输 运输 1 h，
循环 循环 氨基酸；带负电荷的氨基酸（Asp+Glu）数量为
Ae-CK 不进行运输操作 96，带正电荷的氨基酸（Arg+Lys）数量为 81。该
蛋白质的不稳定性指数为 35.16，归类为稳定蛋白
1.9 数据分析 质。亲/疏水性预测结果（图 3）显示，HSPA8 蛋
试验数据均使用 SPSS 26.0 软件进行统计与分 白最大疏水值为 2.100，位于第 409 位氨基酸处；
析，选择单因素方差分析法，采用新复极差法 最小疏水值为−3.311，位于第 592 位氨基酸处；总
（Duncan’s multiple range test）验证组间差异，数 平均亲疏水性为−0.464，表明该蛋白质为亲水性
据用平均值±标准差表示，差异显著性水平设置为 蛋白。
P<0.05。柱状图由 GraphPad Prism 9.0 软件完成 2.3 HSPA8 蛋白的结构分析及亚细胞定位预测
绘制。 对大眼双锯鱼 HSPA8 蛋白的信号肽及拓扑结
2 结果与分析 构进行预测，结果（图 4）表明，HSPA8 蛋白为胞
外蛋白，无信号肽序列，且没有跨膜结构域。
2.1 HSPA8 基因克隆、相似性分析及其系统进化 对 HSPA8 蛋白的亚细胞定位进行分析，结果
树构建 （图 5）显示，HSPA8 蛋白主要定位于细胞质和细
测序结果通过比对，确认扩增产物为 HSPA8 基 胞核，并在这两个区域穿梭及发挥其分子伴侣功
因 ORF。对克隆所得 HSPA8 的 CDS 进行分析并 能，还可能存在于细胞骨架、过氧化物酶体、线粒
预测蛋白质序列，结果显示大眼双锯鱼 HSPA8 基 体中及细胞外。与 UniProt 数据库中同属物种的亚
因的 CDS 区全长 1 953 bp，编码氨基酸残基 650 细胞定位 GO 注释信息对比，大眼双锯鱼 HSPA8
个（图 1） 。对大眼双锯鱼与眼斑双锯鱼的 HSP70s 蛋白的预测结果与数据库中同属物种注释结果基本
家族基因 ORF 序列进行序列比对，结果（表 3） 一致。眼斑双锯鱼的 HSPA8 蛋白（主访问编号：
表明，大眼双锯鱼 HSPA8 基因 ORF 及蛋白质序列 A0A3Q1CEV7，序列相似度为 100%）除了定位于
长度与眼斑双锯鱼相等；大眼双锯鱼 HSPA8 基因 细胞质和细胞核外，GO 注释还显示其可定位于细
与眼斑双锯基因 ORF 相差 16 个碱基，序列相似度 胞质膜中。
为 99.18%，蛋白质序列完全相同。由表 3 可知， 2.4 HSPA8 蛋白结构及功能预测
大眼双锯鱼 HSPA8 蛋白与眼斑双锯鱼的序列相似 对大眼双锯鱼 HSP70s 蛋白的二级结构进行分
度 最 高 （ 100.00%） ， 与 双 线 蚓 螈 （ Rhinatrema 析，结果（图 6）显示，HSPA8 蛋白主要由 α-螺旋
bivittatum）序列相似度最低（93.97%） ，与人类 （蓝色） 、β-折叠（紫色） 、β-转角（绿色）与无规
和 斑 马 鱼 （ Danio rerio） 的 序 列 相 似 度 分 别 为 则卷曲（橙色）4 部分组成，占比分别为 41.85%、

95.11% 和 96.92%。整体来看，HSPA8 蛋白在不同 17.23%、3.38%、37.54%。