Page 27 - 《渔业研究》2026年第2期
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170                                  渔  业  研  究                                     第 48 卷

                  关键词：大眼双锯鱼；HSPA8             基因；序列分析；运输胁迫；表达分析
                  中图分类号：S968.9      文献标识码：A      文章编号：2096 − 9848 （2026） 02 − 0169 − 12

                  热休克蛋白（Heat shock proteins，HSPs）作             鱼类，因独特的外观和有趣的共生行为，广受人们
              为维持细胞稳态的重要蛋白，具有鲜明的生物学特                           的喜爱，市场需求旺盛，交易频繁。然而，在运输
              性。一是保守性，HSPs 广泛分布于组织和细胞中，                        过程中，大眼双锯鱼容易受到环境胁迫的影响，从
              且高度保守。人类（Homo sapiens）的            HSPs 基因       而发生应激反应，影响其健康和存活。模拟鱼类活
              序列与黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）有        72%     体运输的研究涉及多种胁迫条件，包括低氧、氨
              的同源性，与大肠杆菌（Escherichia coli）有            52%     氮、亚硝态及硝态氮、振动、挤压（密度） 、捕捞
              的同源性；同时，HSPs 广泛分布于细胞内各细胞                         操作和饥饿等。目前多数研究集中在单因素胁迫，
              器中，如内质网中具有标志性的              GRP94（HSP90B1）       而将运输应激作为多种胁迫的综合性研究相对较
              和  BIP（HSPA8） ，细胞质基质中具有标志性的                      少 [13] 。探索  HSPA8  基因参与大眼双锯鱼长途运输
              HSP70s（HSPA1A/ HSPA1B）和      HSC70（HSPA8）；       导致的应激性免疫应答反应的调控对鱼类远程运输
              同一种    HSP  可以定位于多个细胞器中，在同一个                     及免疫性能具有重要意义。因此本研究克隆了大眼
              细胞器中也可以找到功能不同但相关的                   HSPs，如       双锯鱼    HSPA8  基因编码序列（Coding sequences，
              酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）细胞质基质              CDS） ，并进行相关生物信息学分析，检测该基因
              中有   6  个不同的    HSP70s 家族蛋白     SSA1~SSA4  和     的组织分布与其在不同运输模拟情况下免疫组织中

              SSB1~SSB2 [1–3] 。二是普遍性，遇到热刺激时，从                  的分布特征，以期了解该基因的生物学特性，并判
              原核到真核生物，细胞内的大多数蛋白质合成停                            断该基因是否可作为反映大眼双锯鱼处于运输应激
              止，而    HSPs 却大量生成     [4–6] 。这说明  HSPs 的产生       性免疫抑制状态的指标，从而为后续深入研究
              是广泛存在于生物界有机体内的应对外界刺激的有                           HSPA8  基因的免疫调控功能提供参考。
              效手段，HSPs 广泛表达于所有生物体和所有细胞
                                                                1 材料与方法
              中。三是多诱因及交叉保护性，除温度变化热刺激
              外，有机物污染、重金属污染、缺氧或氧自由基、                            1.1 试验用鱼
              基因损伤、组织损伤、病毒或细菌感染都会引起                                试验所用大眼双锯鱼购自中国水产科学研究院
              HSPs 的上调；此外，食物密度、捕食者的存在、                         南海水产研究所深圳试验基地，暂养在观赏鱼实验车
              振荡以及一些低等无脊椎动物的再生过程也会提                            间的循环水玻璃缸（54 L）中，在水温（27.0±0.5） ℃、
              高  HSPs 的表达 。研究还发现，一种环境应激诱                       盐度  30±1、pH 8.1~8.3、溶解氧含量>5 mg∙L 环
                            [7]
                                                                                                       −1
              导产生的     HSPs 可提高生物对其他应激因子的抵抗                    境条件下驯化      7 d  以上，每日定时投喂        4  次。本研
              能力  [8–10] 。                                     究得到中国水产科学研究院南海水产研究所动物伦
                  大眼双锯鱼（Amphiprion ephippium）是鲈形               理委员会的批准，批准编号为             nhdf2025-32。
              目（Perciformes） 、雀鲷科（Pomacentridae） 、海             1.2 试验试剂
              葵鱼亚科（Pomacentridae）鱼类的统称，又称海葵                        珊瑚专用海水素购自海之绚水族用品科技有限
              鱼，传统形态学把该亚科分成双锯鱼属（Amphiprion）                    公司；RNA isolater Total RNA  和  HiScriptⅡQ Select
              及棘颊雀鲷属（Premna） ，迄今双锯鱼属有                29  种，    RT SuperMix for qPCR（+gDNA wiper）购自南京
              全世界棘颊雀鲷属仅           1  种，海葵鱼亚科总计         2  属    诺唯赞生物科技股份有限公司；氯仿替代物                    Buffer
                                                                                                     ®
              30  种 [11] 。大眼双锯鱼原生在印度洋和太平洋较温                    EX  购自北京索莱宝科技有限公司；TransScript  First-
              暖的水中，栖息于珊瑚礁与岩礁，幼鱼时常与大的                           Strand cDNA Synthesis SuperMix、EasyPure  PCR  和
                                                                                                   ®
              海葵、海胆或小的珊瑚顶部共生。其身体色彩艳                            Purification  KitPerfectStart   Green  qPCR  SuperMix
                                                                                     ®
              丽，多为红色、橘红色，部分品种有黑色斑块，体                           购自北京全式金生物技术股份有限公司；感受态细
              形各异，体色多变，通常体侧有白色条纹。大眼双                           胞  E. coli DH5α Competent Cells、快速  PCR  聚合酶
              锯鱼以独特的艳丽体色被认为是一类具有较高观赏                           PrimeSTAR  Max DNA Polymerase、预加染料的预
                                                                         ®
              价值的热带珊瑚礁鱼类          [12] 。                       混型  Ex Taq  酶  Premix Taq™ （Ex Taq™ Version 2.0
                  大眼双锯鱼作为一种重要的海洋馆及水族观赏                         plus dye） 、TA  克隆用试剂盒       pMD™18-T Vector
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