Page 43 - 《渔业研究》2025年第5期
P. 43

584                                  渔  业  研  究                                     第 47 卷

              生呼肠孤病毒属（Aquareovirus） ，可分为             3  种基     通过Ⅰ型干扰素通路启动天然免疫应答                 [22-23] 。
              因型（GCRV-Ⅰ、-Ⅱ和-Ⅲ型） ，其中             GCRV-Ⅰ和            病毒的传播是疾病流行的核心环节，主要包括
              GCRV-Ⅲ致病性相对较弱；GCRV-Ⅱ型（代表株                        垂直传播和水平传播         [24] 。水平传播通过受污染的
              GCRV-HZ08）致病性最强，是当前感染草鱼流行                        水体、饵料或个体间接触来实现，是水产养殖中病
              毒株  [6-7] 。因此，开展    GCRV-Ⅱ的防控研究是产业               毒扩散的主要方式，已在多种水产病毒如鱼类病毒
              发展的迫切需求。                                         性神经坏死病（Viral nervous necrosis，VNN）和虾
                  在鱼类病害研究中，病原的分离与鉴定对病害                         白斑综合征病毒（White spot syndrome virus，WSSV）
              防控具有关键作用。回归感染实验是确认病原体的                           中得到证实     [25-27] 。目前对  GCRV  特别是   GCRV-Ⅱ
              金标准；但草鱼等大型经济鱼类存在体型较大、饲                           传播机制的研究相对有限。在稀有鮈鲫中，GCRV
              养成本高、实验周期长等局限性，因此利用模式水                           的感染实验仍局限于腹腔注射             [28]  或浸泡 [8, 29]  等方
              产动物开展研究已成为重要手段，在水生动物疾病                           式，其能否通过模拟自然接触的方式实现水平传播
              防控领域中展现出广阔的应用前景 。理想的模式                           尚未见系统报道。因此，建立一种模拟自然感染条
                                             [8]
                                                               件的  GCRV-Ⅱ感染模型，对于研究             GCRV-Ⅱ的传
              水产动物应具备遗传背景清晰、饲养管理标准化、
                                                               播规律、感染机制以及开发有效防控策略具有重要
              对特定病原敏感等特点，可用于替代原宿主进行传
                                                               意义。本研究通过共居感染实验，模拟水平传播途
                                             [9]
              播规律、致病机理及防控技术研究 。国际上，斑
                                                               径，探究    GCRV-Ⅱ在稀有鮈鲫中的传播效率及感
              马鱼（Danio rerio） 、青鳉（Oryzias latipes） 、黑头
                                                               染特性，旨在建立一种稳定、可靠的稀有鮈鲫
              软口鲦（Pimephales promelas）  [10]  和孔雀鱼（Poecilia
                                                               GCRV-Ⅱ自然感染模型。
              reticμlata） [11]  等小型鱼类已被确立为标准模型动物，
              用于鲑呼肠孤病毒（Chum salmon reovirus，CSV） 、              1 材料方法
              鲤疱疹病毒（Cyprinid herpesvirus，CyHV）等多种
              鱼类病毒性疾病的研究          [12-14] 。近年来，中国积极推            1.1 实验动物管理和病毒来源
                                                                   实验所用稀有鮈鲫购自国家水生生物种质资
              动水产动物模型的研发，逐步构建标准化研究体系，
                                                               源库。实验鱼饲养于水温为（28.0±0.5） ℃              的实验
              已先后成功培育了剑尾鱼（Xiphophorus hellerii）         [15]
                                                               室循环水养殖系统中，每日投喂              2  次饲料，实验前
              和红鲫（Carassius auratus）   [16]  等中国特有的鱼类
                                                               24 h  停止投喂。经聚合酶链式反应（Polymerase
              模式动物。
                                                               chain reaction，PCR）检测，所有实验鱼均为         GCRV
                  稀 有 鮈 鲫 （ Gobiocypris  rarus） 是 鲤 形 目
                                                               阴性。实验鱼在含        100 mg/L MS-222  水中麻醉后进
              （ Cypriniformes） 、 鲤 科 （ Cyprinidae） 鮈 鲫 属
                                                               行注射等实验操作。本实验获得了上海海洋大学实
              （Gobiocypris）的小型淡水鱼类，为中国土著鱼
                                                               验动物伦理委员会的批准，批准编号为                     SHOU-
              类，具有性成熟周期短、实验室容易饲养等优点，
                                                               DW-2025-092。
              其作为中国特有水产模式动物，已被广泛应用于鱼
                                                                   GCRV-Ⅱ型毒株（YX246        株）病毒液由中国
              类病害和环境科学等方面的研究工作中。研究表                            科学院水生生物研究所徐镇研究员惠赠。
              明，其对化学物质敏感度高，胚胎可用于毒性实                             1.2 主要试剂和仪器
              验 [17-18] 。更重要的是，稀有鮈鲫对          GCRV  高度敏            MS-222（Sigma，美国）；TRIzol（Invitrogen，美
              感，如王铁辉等        [19]  发现，GCRV  人工感染可导致                      ®
                                                               国） ；Hifair AdvanceFast One-step RT-gDNA Diges-
              稀有鮈鲫出现典型的出血症状并死亡，病毒可在                                                                  ®
                                                               tion SuperMix（翊圣，中国）；Hieff ΜNICON  qPCR
              其体内连续传代；刘林怡等             [20]  进一步证实，肾上          SYBR Green Master Mix（翊圣，中国） ，LightCy-
              腺素应激可增强其感染性等。这些研究证明了稀有                           cle480（Roche，德国） ；PCR    扩增仪（ABI，美国） 。
              鮈鲫可作为       GCRV  感染治病研究的理想模式动                    1.3 病毒制备与滴度测定
              物。此外，苏建国等          [21]  在通过  GCRV  人工感染稀            将病毒组织液于        4 ℃  经  8 000 g、12 000 g  分
              有鮈鲫的实验中发现，鳃组织              Mx 基因表达量在感            别离心    15 min，取上清液经       0.22 μm  滤膜过滤除
              染后   12 h  显著升高。而      Mx1  是干扰素刺激基因             菌，采用实时荧光定量          PCR（Quantitative real-time
              （Interferon stimulating gene，ISG）中较为重要的          PCR，qRT-PCR）   [30]  测定其病毒拷贝数为       7.10×10 2
              效应分子之一，可抑制抗病毒复制，若其被激活，                           拷贝/μL。通过腹腔注射途径（15 μL/尾）接种
              可表明在病毒感染后，机体识别了病毒的存在，并                           50  尾  5  月龄的健康稀有鮈鲫。实验持续            25 d，期
   38   39   40   41   42   43   44   45   46   47   48