Page 156 - 《水产学报》2025年第6期

程庚，等 水产学报, 2025, 49(6): 069613

已报道的方法配置 CB 。低盐度海水用正常海 相关方法，根据以下方法确定 CB 和低渗处
[14]
水 (27) 于曝气 24 h 后的淡水按照比例混合获得， 理诱导四倍体最佳组合：①将二倍体卵子密
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即用即配。本实验优化三个主要影响因素：试 度调整至 1×10 个/L，受精后当第一极体出现
剂处理强度、诱导时机和持续诱导时间。诱导 30% 时，用 4 个 CB 浓度 (0.25、0.50、0.75 和
四倍体途径：途径Ⅰ (2n♀+2n♂)、途径Ⅱ (3n♀+ 1.00 mg/L) 及 4 个盐度 (6、8、10 和 12) 分别持
2n♂) 和途径Ⅲ (2n♀+4n♂)。每组 3 次重复。 续处理 20 min，洗卵去除多余精子，将受精卵

途径Ⅰ(2n♀+2n♂) 诱导四倍体最佳条件组 转移至 100 L 塑料桶中进行孵化，测定每组的
合 参考 Tan 等 [10] 和李永国等 [11] 相关方法， 孵化率和 D 幼率，24 h 后通过流式细胞仪测定
根据以下方法确定 CB 和低渗处理诱导四倍体 四倍体率，根据四倍体率确定最佳 CB 处理浓
最佳组合：①将二倍体卵子密度调整至 1×10 6 度以及低渗处理盐度；②把卵子密度调整至
个/L，受精后当第一极体刚出现时，分别用 1×10 个/L，当受精卵第一极体出现 30%、40%
6
CB 浓 度 为 0.25、 0.50、 0.75 和 1.00 mg/L 等 4 和 50% 时，通过上述的最佳 CB 处理浓度或最
个梯度或在盐度为 6、8、10 和 12 等 4 个盐度 佳低渗处理盐度持续处理 20 min，孵化后 24 h
分别持续处理 20 min，洗卵去除多余精子，将 测定四倍体率，确定最佳处理时机。③把卵子
受精卵转移至 100 L 塑料桶中进行孵化，测定 密度调整至 1×10 个/L，在上述最佳处理时机，
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每组的孵化率和 D 幼率，24 h 后通过流式细胞 通过最佳 CB 处理浓度或最佳低渗处理盐度分
仪测定四倍体率，根据四倍体率确定最佳 CB 别持续处理 10、15、20 和 25 min，孵化后 24 h
处理浓度以及低渗处理盐度；②把卵子密度调 测定四倍体率，确定最佳持续处理时间。每个
整至 1×10 个/L，当受精卵第一极体刚出现时， 实验重复 3 次，同时设置 CG 2 N 和三倍体对照
6
通过上述的最佳 CB 处理浓度或最佳低渗处理 组 (2n♀+4n♂，CG )。
3N
盐度分别持续处理 10、15、20 和 25 min，孵化
1.4 幼虫及稚贝培养
后 24 h 测定四倍体率，确定最佳持续处理时间。
将各组最佳诱导条件组合得到的 D 形幼虫
每个实验重复 3 次，同时设置二倍体对照组
(2n♀+2n♂，CG )。 于 100 L 塑料桶中进行培育。控制每组初始幼
2N

途径Ⅱ(3n♀+2n♂) 诱导四倍体最佳条件组 虫密度为 1 个/mL。培育期间每日投喂球等鞭金
合 参考 Guo 等 [12] 和 Peachey 等 [14] 相关方法， 藻 (Isochrysis galbans) 3 次，每日换水三分之一，
根据以下方法确定 CB 和低渗处理诱导四倍体 每隔 3 日测 1 次幼虫存活率。使用扇贝片作为
最佳组合：①将三倍体卵子密度调整至 1×10 6 附着基，幼虫附着变态后继续培养约 1 个月至
个/L，受精后当第一极体刚出现时，用 4 个 稚贝大小达到 3~5 mm，然后各组随机取样 50
个稚贝进行倍性测定。
CB 浓度 (0.25、0.50、0.75 和 1.00 mg/L) 和 4 个
盐度 (6、8、10 和 12) 分别持续处理 20 min，洗 1.5 测定卵裂率、D 幼率、幼虫四倍体率、幼
卵去除多余精子，将受精卵转移至 100 L 塑料 虫成活率、稚贝四倍体率
桶中进行孵化，测定每组的孵化率和 D 幼率，
测量各实验组的卵裂率、D 幼率、幼虫四
24 h 后通过流式细胞仪测定四倍体率，根据四
倍体率、成活率及稚贝四倍体率等指标。卵裂
倍体率确定最佳 CB 处理浓度以及低渗处理盐
率指卵裂数占总受精卵数的百分比，D 幼率指
度；②把卵子密度调整至 1×10 个/L，当受精
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24 h 时 D 形幼虫占总卵裂数量的百分比，幼虫
卵第一极体刚出现时，通过上述最佳 CB 处理
成活率为取样期幼虫数量占孵化出来的第 1 天
浓度或最佳低渗处理盐度分别持续处理 10、15、
幼虫数量的百分比。幼虫四倍体率通过流式细
20 和 25 min，孵化后24 h 测定四倍体率，确定
胞仪进行测定。稚贝四倍体率指四倍体稚贝占
最佳持续处理时间。每个实验重复 3 次，同时设置
所检测 50 个稚贝的百分比。

CG 2 N 和 2.5N 对照组 (3n♀+2n♂，CG 2.5N )。

途径Ⅲ(2n♀+4n♂) 诱导四倍体最佳条件组 1.6 数据分析
合 参考 Benabdelmouna [15] 和 Mccombie 等 [16] 实验数据采用 SPSS 24.0 软件进行分析，
中国水产学会主办 sponsored by China Society of Fisheries https://www.china-fishery.cn
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