Page 163 - 《水产学报》2025年第5期

车行，等 水产学报, 2025, 49(5): 059114

表 1 引物列表
Tab. 1 Principal oligonucleotide primers used in this study
目的基因 引物 序列 产物长度/bp
gene target primer sequence (5′-3′) product size
attICE SerE-F2 CGTTGTGAACACTGTGACCATT 1 043
repA-R GCGTAAGCTACCTTGACCTCTA
cpsL cpsL-F CAATCCTAAGTATTTTCGGTTCATT 688
cpsL-R TAGGAACATGTTCATTAACATAGC
cpsG-3 cpsG-F ACATGAACAGCAGTTCAACCGT 352
cpsG3-R TCCATCTACATCTTCAATCCAAGC
cpsG cpsG-R ATGCTCTCCAAACTGTTCTTGT 272
attL gtfB-F AGCTCTACTCAGTATCAATCTG 895
repA-R GCGTAAGCTACCTTGACCTCTA
attR SerE-F2 CGTTGTGAACACTGTGACCATT 2 219
nudiX-R GTACCAATGCTTCATACCAACT
traC traC-F GTTGCAGGGTCTAATGACATGA 917
traC-R TCAGACGCATATTTGTCCAAT
virD4 virD4-F TTGGATTCGGTGATTGCGGTC 554
virD4-R TGAGAGGTAGAACTTGAGCC
relax1535 relA-F GAACTCAAGCAGCGGCTCTA 1 307
relA-R CTATTCGAGACCTACTTCGC
relaxosome relM-F TGTGTTCAGGAGCTGATGGC 727
relM-R GAAGACAAGCTGACACCAGA
3SER-F TAGTCGTCATGCGATGAAGC 2 589
Ser IME
3SER-R CATGCTGTTCATCGCACTCT
SerI-F TCCATCATCAACCAACGCTCG 757
Ser I
SerI-R GCTGGATTGACAGCTACAG
SerM-F TGAGATGGGACGACTGATTG 980
Ser M
SerM-R TGCTCAGCTTGTAGACTAGC
SerE-F1 ATCATTGATGAGGCAGTTGC 466
Ser E
SerE-R TGGTCACAGTGTTCACAACG
IS30 rpL-F AAGTGCTGGTCCAACTGGTG 479
MFS-R CTAGGTGGTGCAATTGGTGT
混合培养液均匀涂布于左氧氟沙星 (8 mg/L) 抗 HSⅤ。可变区总长约 32.5 kb，含有 7 个 IS (图 1
性平板上，筛选对 LEV 耐药的阳性接合子， 灰色箭头)，形成 3 个复合型转座子。非核心区
PCR 检测血清型和 ICE 核心元件。ICE 两侧的 可被划分为 7 个功能集中区，包括位于热点区
附着位点 attL、attR 分别用引物 gtfB-F 和 repA-R、 的 DⅠ~DⅢ和位于可变区的 DⅣ~DⅦ (图 1)。

SerE-F2 和 nudiX-R 检测，选择 PCR 阳性测序。
2.2 ICE 插入位点

2 结果 ICEs 常存在于染色体上的特定基因内 [13] ，
可能与 ICE 所携带的整合元件对这些高度保守
2.1 ICESag1535 基本结构 的特定基因的特殊结构识别相关。在整合重组

经生物信息学分析和判断，ICESag1535 位 过程中，松弛体在 oriT 处切开，并牵引 DNA
于 WC1535 基因组位置 (305 577~379 694 bp) 处， 在偶联蛋白的作用下发生水平转移，受体基因
全长 74 118 bp，包含 73 个蛋白编码基因，GC 组上与 ICEs 发生配对识别的位点称为 attB，
含量为 38%，区别于基因组其他位置的 36%。 ICEs 插入受体基因组时两侧的附着位点分别为
[14]
ICE 接合转移核心元件由 Conj 家族保守接 attL 和 attR ，当 ICESag1535 整合入 WC1535
Tn5252
合元件组成 (图 1， 黑色箭头形成的主干) ， 基因组时推定的 attICE、attL、attR 序列特征如
[12]
约 26.1 kb，占 ICE 全长的 37.3 %。ICE 的 3′-末 图 2 中标记，其中 attR 与 attICE 之间形成单碱
端为 3 个同向串联的丝氨酸整合酶，按照阅读 基 (G) 重复。oriT 位于 Tn5252 orf10 基因起始
顺序标记为 (Ser 、Ser 、Ser )。核心区存在 5 个 密码子的上游 –95~–133 bp 位置，具有反向重
I
M
E
外源 DNA 频繁插入的热点区域，标记为 HSⅠ~ 复结构，序列切开位置见图 2 中箭头所示。

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