Page 197 - 《水产学报》2023年第1期

操文杰，等 水产学报, 2023, 47(1): 019615

孙远东等 认为，用远缘精子作为激活源，不仅 父本，用同样的方法进行人工繁殖，获得 F 群体，
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能提高雌核发育鱼的存活率，还能极大地简化对 待平游后，放入暂养池中养殖，供实验使用。
雌核发育鱼的鉴定。
1.2 染色体核型分析
鳡 (Elopichthys bambusa) 和 翘 嘴 鲌 (Culter
用鳍条组织原代培养法 [12] 制备染色体标本：
alburnus) 分 别 属 于 鲤 形 目 (Cypriniformes) 鲤 科
取长至 6~8 cm 的幼鱼，剪取少量鳍条，用 AIM
(Cyprinidae)鳡属 (Elopichthys) 和鲌属 (Culter)，而
培养基清洗 3 次 (每次 30 min) 后剪碎，接种于细
彭泽鲫属于鲤科中的鲫属 (Carassius)，相互之间
胞培养瓶，置于 28 °C 培养箱中静置 2 h，弃去培
亲 缘 关 系 较 远 。 鳡 和 翘 嘴 鲌 的 染 色 体 数 均 为
养基，加入 3 mL 新鲜培养基继续培养，每 2~3 天
[4]
2n=48 [9-10] ，与彭泽鲫的核型 (3n=150) 有较大的
更换 1 次培养基。待细胞铺满瓶底约 80% 时，进
差异。团队前期的研究发现，鳡和翘嘴鲌精子不
行传代培养。
需要人工遗传灭活就可直接刺激彭泽鲫卵的胚胎
取第 2~7 代细胞，用秋水仙素处理法 [12] 制备
发育，并产生体型正常的 F 。与彭泽鲫自交 F 相
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比，用鳡和翘嘴鲌精子激活彭泽鲫卵诱导产生的 染色体标本。每个组合在倒置显微镜下选取分散
情 况 好 、 形 态 清 晰 的 完 整 分 裂 相 100 个 ， 用
[11]
F 群体的生长速率存在显著优势 。然而，这种
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Adobe Photoshop CC 2018 软件进行计数，记录每
生长优势在下一代中是否存在暂不清楚。
个分裂相的染色体数目。根据 Levan 等 [13] 的方法
鉴于此，本实验继续以鳡和翘嘴鲌的精子诱
进行染色体分组，按 Matthey [14] 的方法进行染色
导上述彭泽鲫 F 的卵，获得雌核发育 F 群体：
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体臂数 (NF) 的统计，中部和亚中部着丝粒染色体
P×G(彭泽鲫♀×鳡♂) 和 P×Q(彭泽鲫♀×翘嘴鲌♂)，
的臂数计为 2，亚端部和端部着丝粒染色体臂数
以 P×P(彭泽鲫♀×彭泽鲫♂)F 为对照，比较各群
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计为 1，并做出染色体核型图。
体的染色体核型、DNA 含量、形态学特征以及生
长特点等，探究异精雌核发育 F 在细胞学、形态 1.3 DNA 含量测定
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学和生长特性等方面的“异精效应”。研究结果为 用流式细胞计数法 [15] 测定各组合子代的红细
彭泽鲫优良新品种的培育提供参考。 胞核 DNA 含量。随机取长至 6~8 cm 的 P×G 和
P×Q 各 20 尾，以 P×P 为对照，尾静脉采血，用
1 材料与方法
EDTA 溶液稀释后冰上保存。取 10 μL 稀释后的
1.1 构建雌核发育组合 血液用 DAPI 染色 5 min，用 BD FACSCalibur 流
式细胞仪进行上样检测，比较待测样本血细胞峰
性成熟彭泽鲫母本由江西省九江市水产科学
值图，计算相对 DNA 含量和相对 DNA 含量比值，
研究所提供，共 50 尾，每尾体重约 400 g，父本
均表示为平均值±标准差 (mean ± SD)，确定实验
分别为汉江水系翘嘴鲌、长江水系鳡，均置于华
鱼的倍性。
中农业大学水产学院南湖基地进行产前培育至性
成熟。分别以鳡、翘嘴鲌和彭泽鲫为父本，雌性 1.4 形态学比较
彭泽鲫为母本，构建 3 组杂交组合：彭泽鲫♀×鳡 随机取 180 日龄的各组合样本 30 尾，通过
♂、彭泽鲫♀×翘嘴鲌♂和彭泽鲫♀×彭泽鲫♂，于 观察胸鳍形状以及根据传统的腹部检查法初步确
2019 年 5 月进行第一次人工繁殖，催产采用二次 定为雌性。用数字 X 射线成像系统 (APK525HF
腹腔注射法，第一针只注射雌鱼，剂量为 1 μg/ kg Plus VET DR) 拍摄鱼体 X 光照片 (图 1)，用 Adobe
促黄体素释放激素 A2(LHRH-A2) 和 1 mg/ kg 马来 Photoshop CC 2018 软件测量各形态学参数：吻长
酸地欧酮 (DOM)，10 h 后注射第二针，雌鱼注射 (SL)、眼径 (ED)、头长 (HL)、体长 (BL)、全长
剂量为 4 μg/ kg LHRH-A2 和 4 mg/ kg DOM，雄鱼 (TL)、尾柄长 (CPL)、尾柄宽 (CPW)、体宽 (BW)
注射剂量减半。注射后将亲本放入水泥池进行流 等，以及框架性状：D (表示位点 1 与位点 2
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水诱导，8 h 后视亲本成熟程度进行人工授精，受 之间的距离)、D 、D 、D 、D 、D 、D 、
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4-6
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精卵经滑石粉脱黏后分别放入孵化缸进行孵化， D 、D 、D 、D 、D 7-10 、D 、D 8-1 0 和 D 9-10 。
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获得 F ；2020 年 5 月，选择各组合性成熟的 F 1 用 IBM SPSS Statistics 26 和 RStudio 软件对数据进
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雌性 50 尾为母本，再次以鳡、翘嘴鲌和彭泽鲫为 行主成分分析、聚类分析和判别分析。
https://www.china-fishery.cn 中国水产学会主办 sponsored by China Society of Fisheries
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