Page 166 - 《水产学报》2025年第6期
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黎强，等                                                                  水产学报, 2025, 49(6): 069614

                   染色体相关研究是细胞遗传学的基础，在                          海水溶液冲洗受精卵，最后将受精卵置于干净
              现代分类学、生物进化以及遗传育种学等领域                             的海水中进行培养。未经              CB  加倍处理的为单
              被广泛应用 。在贝类中，已经开展了大量核                             倍体组，精子未经紫外线照射的为正常二倍体
                          [5]
              型分析相关研究，如西施舌                (Coelomactra anti-   组，雌核发育二倍体组、单倍体组和正常二倍
                    [6]
                                                    [7]
              quata) 、硬壳蛤(Mercenaria mercenaria) 、青            体组幼虫在相同条件下培养，待胚胎发育至担
                                [8]
              蛤  (Cyclina sinensis) 、波纹巴非蛤     (Paphia und-    轮幼虫时期进行染色体制备的取样。实验过程
              ulata) 、彩虹明樱蛤       (Moerella iridescens) [10]  等。  严格遵守实验动物伦理规范。
                   [9]

              关于菲律宾蛤仔核型分析相关研究目前仅见于                             1.2    实验方法
              王金星等     [11]  及  Borsa 等  [12] ，他们的研究结果表
                                                                   菲律宾蛤仔雌核发育幼虫染色体滴片制备
              明，菲律宾蛤仔染色体为              2n=38  条，核型分别
                                                               参考袁美云等       [15]  的方法，并稍作改动。取少许
              为  28m+10sm  和  18m+20sm。雌核发育是一种能
              在较短的时间内提高家系遗传纯合度的育种方                             担轮幼虫于离心管中           (单倍体组取原肠胚进行
              法，能够快速建立纯系，并且雌核发育个体是                             实验)，加入      0.1%  秋水仙素海水溶液处理            3 h，
                                                               随后转移至       0.075 mol/L  的  KCl 溶液中反渗透
              遗传学分析重要的材料 。在贝类中，雌核发
                                    [13]
                                                               80 min，离心去除      KCl 溶液，加入预冷的卡诺
              育研究起步较晚，研究内容主要集中在诱导条
                                                               固定液   (甲醇∶冰醋酸=3∶1，体积比) 固定              3  次，
              件地摸索、雌核发育二倍体遗传学分析以及雌
                                                               每次不少于      15 min，−20 °C  过夜，次日取出离
                                           [14]
              核发育后代细胞学研究等方面 ，而关于菲律
                                                               心去其上清液后，加入体积分数为                  50%  的冰醋
              宾蛤仔雌核发育材料的染色体相关研究还未见
                                                               酸吹打，采用热滴片法制片，然后用                   Giemsa 染
              报道。
                                                               液扣染    30 min，自然晾干后镜检。
                   本研究选用前期诱导的雌核发育菲律宾蛤
              仔及正常二倍体幼虫为实验材料，利用热滴染                             1.3    染色体计数与核型分析
              色体制备方法对菲律宾蛤仔雌核发育二倍体、                                 选取染色体形态完整，分散均匀的雌核发
              单倍体及正常二倍体进行核型分析，为菲律宾蛤                            育二倍体中期分裂相、雌核发育单倍体中期分
              仔遗传育种及细胞遗传学研究提供参考资料。                             裂相以及正常二倍体中期分裂相进行染色体计

                                                               数，使用     CCD  相机   (Leica DF 450C) 拍摄。利
              1    材料与方法
                                                               用  Photoshop 21.2 (2020) 软件分别进行染色体长

              1.1    实验材料                                      臂和短臂的测量，用于             Microsoft Excel 2010  软
                                                               件进行数据整理，计算染色体相对长度和臂比，
                   菲律宾蛤仔雌核发育二倍体幼虫为                    2023
                                                               分离每条染色体并且进行配对，进行染色体的
              年  7—8  月在大连金砣水产食品有限公司贝类育
                                                               分类与结果统计，绘制核型图              [8,16] 。
              苗场进行培育，菲律宾蛤仔亲本采自山东威海
              沿海，为性腺发育良好的              2  龄种贝。将所有菲             2    结果
              律宾蛤仔分别于育苗池中充气培养，每天投喂
              单胞藻。对性腺发育成熟的菲律宾蛤仔亲贝进                             2.1    染色体数目的确定
              行人工催产，使雌雄亲本单个产卵和排精，分                                 菲律宾蛤仔雌核发育二倍体、单倍体及正
              别获得精子和卵子，镜检确保无污染后进行雌                             常二倍体染色体数目统计结果显示，正常二倍
              核发育诱导实验。雌核发育二倍体诱导方法参                             体组统计的分裂相数目为              60  个，染色体数目
              考聂鸿涛等       [13]  在皱纹盘鲍   (Haliotis discus han-
                                                               2n=38  的核型占比为      83% (图  1-a)；单倍体组统
              nai) 和栉孔扇贝      (Chlamys farreri) 雌核发育二倍         计的分裂相数目为          83  个，染色体数目        n=19  的
              体研究中的诱导方法，并稍作调整，使用                       230     核型占比为      67.47%；雌核发育组统计的分裂相
              µw/cm 的 紫 外 线 照 射 精 子      9 s， 照 射 剂 量 为        数目为    79  个，染色体数目        2n=38  的核型占比
                    2
              2 070 µw·s/cm ，之后同卵子进行受精，通过显                     为  41.77%。
                           2
              微镜观察受精卵，当           80%  的受精卵排出第一极
                                                               2.2    核型分析
              体  (PB1) 时采用细胞松弛素          B (CB，0.75 mg/L)
              持续处理     20 min，随后采用       0.1%  的二甲基亚砜              每组选取      10  个染色体形态清晰分布均匀

              https://www.china-fishery.cn                           中国水产学会主办    sponsored by China Society of Fisheries
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