Page 35 - 《渔业研究》2026年第3期
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328                                  渔  业  研  究                                     第 48 卷

               2.5 AciHV  特异性   PCR  检测                        下 , 针 对   AciHV-1  终 止 酶 基 因  ter( 图  6A) 及
                  6  尾患病杂交鲟(S1~S6)的肝脏及肾脏              DNA      AciHV-2  DNA  聚 合 酶 基 因  dna  pol( 图  6B) 的
              模板的电泳检测结果如图            6  所示。S1~S6  均能扩增         PCR  检测结果均为阴性。上述结果表明,6                尾患病
              出与   AciHV-3 MCP  基因预期大小(536 bp)相符               杂交鲟均为      AciHV-3  单一感染,排除了        AciHV-1
              的特异性条带,且条带清晰、单一(图                6C) 。相比之        和  AciHV-2  感染的可能性。

               长度/bp
                Length  M  S1  S2  S3  S4  S5  S6  NC  M  S1  S2  S3  S4  S5  S6  NC  M  S1 S2  S3 S4  S5 S6  NC
                 2 000
                                                                                   AciHV-3 536 bp
                 1 000
                  750
                  500
                  250
                  100
                               AciHV-1           A               AciHV-2      B            AciHV-3      C
                                       图 6    不同患病杂交鲟   AciHV  特异性基因  PCR  检测电泳图
                 Fig. 6    Electrophoresis of PCR detection of AciHV specific gene from different diseased A. baerii ♀×A. schrenckii ♂

                  注:A. AciHV-1 检测结果;B. AciHV-2 检测结果;C. AciHV-3 检测结果。M. DNA          分子质量标准物(2 000 bp) ;
              S1~S6. 分子质量标准物检测样本;NC. 阴性对照,以超纯水作为模板。
                  Notes: A. Detection results of AciHV-1; B. Detection results of AciHV-2; C. Detection results of AciHV-3. M. DNA marker
              (2 000 bp); S1–S6. Test samples; NC. Negative control, ultrapure water is used as the template.
                  为进一步验证病原真实性,按照               1.7  方法随机       AACCTTCTCCAGCGTGTGCTGTGGGTCGTTGG
              选取一个     PCR  阳性产物(S2)进行         TA  克隆及双        CTTTGTCAAACTCGTGCTCGTAGTAGCGGATG
              向测序,测序结果如下:                                      AACAACAGTTGGATCAAAGGGTCTGAGAACC
                  TGTAGATGCCCAGGCCCTTCAGGCCAGT                 CCAGGTGAATCCCGTCGTTGGAGTTGGCGTTG
              CTGCACCAGTGACTGTGCCTCGTCGACCCGA                  CGCGGCAAGTCCACCATGGGTTGCAACATCCG
              TAGGGCTTGAAATGCAAGACGCGGTTCGTGA                  CCGCCGGTCGAAGATGTTCTCGTTGACCTTTTC
              TCCACGGCGTCACGCACAGCGTGTAATACTT                  GACCCAGTACTTGAGTATGGCCGCGTCTTTGA
              GATGAACAGGGACTGGGTTTCCGTTAGGCCT                  AATGG
              TCGGTGGCCGCGCGTGGAACGGGGTTTACGA                      BLAST  分析显示,该序列与        AciHV-3(登录号:
              ACAGCTGGTGGATTTCGAGGATCTGTGCCAG                  OV754656.1、OR242753.1)有较高的同源性。基
              GGAATGGTGGAGACCTCCCGTGCACCCGAGG                  于  MCP  基因构建的系统发育树显示,S2           与  AciHV-3
              CTGGTGAACAAATGCTCGTGGGTCTGTAGAA                  聚为一簇(图       7) ,进一步明确了其作为          AciHV-3
              TGGTCTTCAGCCCACACCTGAGCAAGATGAA                  成员的分类地位。

                                         89  鲟疱疹病毒 2 型 AciHV-2 KY440364.1
                                       99   鲟疱疹病毒 2 型 AciHV-2 AY874417.2
                           23             鲟疱疹病毒 2 型 AciHV-2 EF685906.1
                                                                    鲟疱疹病毒 1 型 AciHV-1 OP729415.1
                         21
                                                         100  鲟疱疹病毒 1 型 AciHV-1 OK275733.1
                       65
                                                                      鲤疱疹病毒 3 型 Cyprinid herpesvirus 3 AB375391.1
                                                     鲤疱疹病毒 2 型 Cyprinid herpesvirus 2 OR123892.1
                                                   S2
                                                                     鲟疱疹病毒 3 型 AciHV-3 OV754656.1
                                                                 100  鲟疱疹病毒 3 型 AciHV-3 OR242753.1
                          2.00
                                         图 7    基于  AciHV MCP  基因序列构建的系统发育树
                             Fig. 7    Phylogenetic tree constructed based on the MCP gene sequences of AciHV

               2.6 临床样本病原筛查与共检出分析                              66.7%(4/6) (表  3) 。进一步分析发现,S1、S2、
                  在所采集的      6  份杂交鲟临床样本中,AciHV-3              S5  及  S6  样本表现为病毒与细菌的共同阳性,占受
              的检出率为      100%(6/6) ,海豚链球菌的检出率为                 检样本的    66.7%(4/6);而   S3  和  S4  仅检出  AciHV-3
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