Page 91 - 《渔业研究》2025年第5期
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              （Crassostrea） [1-2] 。其主要分布于广东、广西省，               在揭示香港牡蛎应对才女虫感染的内在机制，为牡
              在福建、海南省也有少量分布，常生长在低潮线附                           蛎养殖业寄生虫病的防控提供坚实的理论依据。
                             [3]
              近及入海口区域 。香港牡蛎肉质鲜美，营养丰
                                                                1 材料与方法
              富，深受广大消费者的喜爱，具有极高的经济价
              值。据统计，2024        年香港牡蛎年产量高达            203×      1.1 牡蛎样品采集
                                                 [4]
              10  t，已成为沿海渔民的重要经济支柱 。然而，                            广东省珠海市荷包岛牡蛎养殖区近               5  年来一直
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              在牡蛎养殖过程中，香港牡蛎极易感染包括才女虫                           是才女虫感染高发区，感染率为               90%  以上。2024
              （Polydora spp.）在内的多毛类寄生虫          [5-6] ，这一问     年  10  月  28  日，在该海区牡蛎养殖场（21°53′00″N、
              题给牡蛎养殖业带来巨大的挑战。                                  113°09′16″E）随机采集     49  个香港牡蛎（以下简称
                  才女虫病在全球范围内广泛流行，对美国西海                         牡蛎） ，带回实验室后冲洗干净并称重，测量壳高
              岸、澳大利亚的危害尤为严重              [6-7] 。才女虫能够在         和壳长等性状指标。将牡蛎敲开，根据内壳的管道
              贝壳上穿凿管道，致使壳内面形成黑褐色的痂皮，                           数量判断是否感染才女虫，并统计才女虫感染率，
              俗称“黑壳病”       [8-9] 。这些管道严重损害了贝壳的完               然后取其外套膜和肝胰腺置于液氮速冻后，−80 ℃
              整性，特别是闭壳肌周围的贝壳变得异常脆弱，在                           保存；对牡蛎右壳进行拍照，用于统计黑壳面积占
              日常养殖操作过程中极易破裂。当虫体进一步                             比；用钳子和镊子小心地将牡蛎壳中的才女虫挑
              钻穿贝壳、侵入软体部时，会直接对软体组织造成                           出，用于才女虫的形态和分子鉴定；活体观察后，
              侵害，使其周围出现炎症，局部形成脓肿或溃疡，                           一部分才女虫保存于          10%  福尔马林溶液中，另一
              同时产生一种特殊的臭味，严重影响了牡蛎的品                            部分才女虫保存于无水乙醇中。中国水产科学研究
              质。据资料记载，1994           年才女虫引发的“黑壳                院南海水产研究所实验动物福利与伦理委员会批准
              病”，致使河北昌黎沿海养殖区               5 cm  以上的扇贝         动物实验，批准编号为          nhdf2025-13。
              成贝死亡率达到        30%~50%  [10] ；在 2~3  龄的合浦珠        1.2 才女虫物种鉴定与分组
              母贝（Pinctada fucata）和    3~4  龄的育珠贝中，感             1.2.1 才女虫形态鉴定
              染才女虫后，马氏珠母贝死亡率高达                 71%，育珠贝             将活体才女虫挑出后，置于装有原海水的凹载
              死亡率更是达到        89%，且严重影响珍珠的质量            [11] 。  玻片中，滴加少量         5%  氯化镁（MgCl ）溶液麻醉
                                                                                                2
              才女虫对九孔鲍（Haliotis diversicolor supertexta）        虫体，然后在体式解剖镜下（Leica，M-125）对其
              和杂色鲍（Haliotis diversicolor）同样危害巨大，               口前叶、脑后脊、鳃和肛部等形态特征进行观察。
              能够感染鲍苗、成鲍和亲鲍，而被感染的鲍鱼贝壳                           对于粗足刺刚毛等较为微小的结构，可将虫体压
              易碎，贝体消瘦，严重时甚至死亡                 [12] 。澳大利亚       片，置于生物显微镜下观察。
              也曾报道过才女虫感染造成鲍鱼养殖业遭受的严重                            1.2.2 DNA  提取与测序
              经济损失    [13] 。                                       切取  30~50 mg  用乙醇保存的才女虫样品，置于
                  目前，对才女虫的研究已在多个方面取得了一                         新离心管中，并开盖将乙醇晾干。参照软体动物组
              定的成果，涵盖形态分类、分子系统发育、栖居习                           织 DNA  抽提试剂盒（美基生物，广州）的使用说明
              性、生殖方式和幼体发育等领域              [14-17] 。利用转录组       书进行样品     DNA  提取。使用才女虫属线粒体细胞色
              学分析发现，才女虫感染会影响香港牡蛎和虾夷扇                           素  C  氧化酶Ⅰ（COⅠ）引物对         X1-FF2（5’-CCTW-
              贝（Patinopecten yessoensis）细胞能量代谢、免疫              GTDATACCTRTCWTAATT-3’）/X1-R6（5’-CCTG-
              应答和物质运输       [18-19] 。为深入探究这一问题，本研              TAAATARAGGGAATCA-3’）和       X1-F2（5’-CCWG-
              究采集广东省珠海市荷包岛自然感染才女虫的香港                           ATATRGCATTCCC-3’）/X1-R2（5’-GCKARYCAD-
              牡蛎样本，运用图像处理（Photoshop，PS）技术                      CTAAATACTTTAA-3’）扩增才女虫序列，目标序列
              精确统计才女虫感染导致的香港牡蛎黑壳面积占比                           长度为 982 bp/685 bp  [20] 。PCR 扩增体系（25.0 μL） ：
              后，将样本分为低度感染组、中度感染组和高度感                           模板  DNA 2.0 μL、PCR Mix（东盛，广州）12.5 μL、
              染组。随后，结合实时荧光定量聚合酶链式反应                            上下游引物各       1.0 μL（10 μmol·L ） 、灭菌   ddH O
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              （ Quantitative  real-time  polymerase  chain  reaction，  8.5 μL。扩增反应程序：94 ℃ 5 min；94 ℃ 1 min，
              qRT-PCR） 技术，对比不同才女虫感染程度下香                        55 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，30  个循环；72 ℃ 10 min。
              港牡蛎凋亡和免疫相关基因的差异表达。本研究旨                           扩增产物用     1%  琼脂糖凝胶电泳检测，将单一条带
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