Page 168 - 《水产学报》2026年第04期

刘洋豪，等：基于形态和 DNA 条形码相结合的大量鱼卵群落分析方法及其在琼东海草床-珊瑚礁
4 期 50 卷
景观中的应用

形状 卵膜结构 卵周隙 油球 胚体色素 类群
shape chorion structure perivitelline space oil globule embryonic pigmentation group
卵径大小
egg diameter
椭圆形 胶质丝 宽 有 有 ……
elliptical gelatinous filaments wide present present
鱼卵数＞200粒, 抽 200 粒 C
分类 窄 无 无
鱼卵数≤200 粒, 全分类 圆球形 网纹 narrow absent absent
if eggs number＞200, spherical reticulate B
randomly select 200 eggs;
if≤200, classify all eggs 凸起 A
protrusions
A…
平滑
计数 smooth A2
counting
A1
确定种类组成 鱼卵抽样拍照/分子鉴定
determine species composition subsampling of eggs for photography/molecular identification

根据各种类所占比例估算其在每一样品中数量 流程结束
estimate the number of each species in each sample according to its proportion end of procedure

图 2 鱼卵分类流程图
Fig. 2 Methodology for fish egg classification
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的形态差异，进一步划定亚类群。对各形态类群/ IRI = N × F ×10
亚类群进行计数。 式中，N 为每一种鱼卵数量占鱼卵总数量的百分
比 (%)，F 为每一种鱼卵种类出现的频率 (%)。定
1.4 确定种类组成
义 IRI≥100 为优势种，100＞IRI≥10 为常见种，
对于形态特别、数量较少 (不超过 20 粒) 的 [25]
IRI＜10 为偶见种 。
卵粒，如卵径特别大、卵膜结构特别 (胶质丝、网
纹结构等)，则全部进行 DNA 测序，确定种类。 2 结果
卵粒数量较多的形态类群/亚类群选取一定数量或
比例的卵粒进行分子鉴定 (图 2)。在体视显微镜 共采集 96 份鱼卵样品，鱼卵总数为 86 596
(Nikon SMZ1270) 下对选取的鱼卵逐一进行图像采 粒，共划分为 20 个形态类群 (表 1，图版)。对各
集、测量形态学数据，以便在分子种类鉴定后进 形态类群/亚类群抽样，测定 1 400 粒鱼卵 COI 基
行鱼卵种类的典型形态特征描述。鱼卵编号后置 因序列，其中 1 208 粒成功测序，共鉴定出 66 个
于 0.2 mL 装有 75% 乙醇的离心管−20 ℃ 保存，以 种类，隶属 8 目 29 科 45 属。鲈形目种类数最多
进行分子种类鉴定。按标准程序逐一测定 COI 基 (30 种，占种类数的 45.5%)，其次为鲉形目 (13 种，
因序列 。采用试剂盒 (Zebra Fish Direct PCR Kit- 19.7%)(表 2)。
[20]
UNG，成都福际生物技术有限公司) 提取鱼卵
2.1 形态类群与种类组成的对应关系
DNA 。 COI 基 因 序 列 扩 增 引 物 为 FishF2 和
[14]
FishR2 。所得序列通过 MEGA11 对序列进行比 类群 1 和类群 2 的典型特征为卵径大 (2.82~
[21]
对和手动编辑。整理好的序列通过生命条形码数 4.33 mm)，卵膜平滑，包括鳗鲡目海鳝科的 6 种
据系统 BOLD systems、GenBank 数据库进行比对， (表 1)。类群 3~13 均为中等卵径 (1.03~1.59 mm)，
匹配相似度≥99% 认定为同种，92%~99% 认定为 其中类群 3 的典型特征为卵膜具胶质丝，为银汉
属，85%~92% 鉴定为科 [22-23] 。根据各种类在该样 鱼目银汉鱼科美银汉鱼属的 2 种。类群 4 卵膜具
品中的数量比例估算各种类的数量。选用相对重 网纹和凸起，卵周隙窄，胚体具色素，包括鲽形
要性指数 (IRI) 描述鱼卵群落优势种，根据以下公 目鳎科条鳎属的 1 种。类群 5~8 卵膜均具网纹，
式进行计算 ： 其中类群 5、6 和 7 包括仙女鱼目狗母鱼科狗母鱼
[24]
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