Page 142 - 《水产学报》2026年第04期

4 期 水 产 学 报 50 卷

4.5.0 软件的 stats 包采用 Kruskal-Wallis 检验，分 显著升高。79 份样本中，阳性样本 47 份，检出
析 eDNA 浓度及目标物种检出与否 (YNeDNA) 在 率 59.49%，涉及 20 个站位，站位检出率 68.97%。
水层、站位和季节间的差异性。 eDNA 空间分布呈极显著异质性 (P<0.01)，高浓度
区仍位于鱼山渔场，但具体站位变为 S23、S25、
2 结果
S28。值得注意的是，秋季 eDNA 的垂直分布模式
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与夏季相反，中层水体平均浓度最高 (1.4×10 拷
2.1 引物和探针特异性验证结果
贝 /L)， 显 著 高 于 表 层 (5.6×10 拷 贝 /L) 和 底 层
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通过特异性引物设计工具、三疣梭子蟹及其 (1.3×10 拷贝/L)。拖网调查数据显示，秋季平均
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近缘种肌肉组织 DNA 的普通 PCR 和荧光定量 生物量密度为 148.19 kg/km ，最高值位于 S15 站
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PCR 验证，最终确定了针对三疣梭子蟹的特异性 位 (1 137.19 kg/km )。eDNA 调查高值区空间分布
2
引物与探针 (表 1)。以三疣梭子蟹及其近缘种的组 及站位检出情况与拖网调查结果基本一致。
织 DNA 为模板进行 qPCR 验证，结果显示，仅三
2.3 三疣梭子蟹 eDNA 的垂直分布特征
疣梭子蟹样本产生特异性扩增，其他近缘种均未
出现扩增，证实所设计的引物和探针具有物种特 夏季三疣梭子蟹环境 eDNA 在浙江中北部海
异 性 。 三 疣 梭 子 蟹 质 粒 标 准 品 的 扩 增 效 率 为 域的垂直分布特征见图 3。夏季 eDNA 丰度主要
84.55%，虽略低于常规标准范围 (90%~110%)，但 富集于水深小于 40 m 的海域，在 S29、S22 及
2
具有良好的线性关系 (R =0.99)，可满足环境样品 S26 等站位观测到高浓度值。eDNA 浓度在 20 与
检测的准确性要求，且阴性对照无扩增。 40 m 水层均较高。从断面分布来看，eDNA 高浓
度 区 集 中 出 现 在 以 及
122.0°E、 123.5°E 29.0°~
表 1 三疣梭子蟹的特异性引物和 TaqMan 探针的设计
29.5°N。尽管统计检验表明三个主要水层 (表、中、
Tab. 1 Design of specific primers and probes for
底) 间的 eDNA 浓度无显著性差异 (P>0.05)，但垂
P. trituberculatus
直剖面显示 eDNA 主要分布于中表层水体。
碱基数量
引物/探针名 序列(5' - 3')
number of 秋季，eDNA 浓度在水层间差异显著 (P<0.05)。
primer/probe sequence (5' - 3')
bases
eDNA 高浓度区域集中于 122.5°~123.5°E 与 29.0°~
Cytb-F TCTTTTGGGTCTTTGTTTAGTTATCC 26
29.5°N(图 4)。 从 水 层 检 出 率 来 看 ， 中 层 最 高
Cytb-R TTCGTAGAAGTCAACCGTAGTTC 23
(21.52%，17 个样品)，其次为表层 (20.25%，16
Cytb-P 6-FAM-CTCACATTGATTTAGCATTT-MGB 20
个 样 品 ) 和 底 层 (17.72%， 14 个 样 品 )， 表 明
2.2 三疣梭子蟹 eDNA 分布特征 eDNA 主要分布于中表层水体。秋季 eDNA 的最
在夏季 78 份样本中，共有 27 份样本 (占比 大检出深度扩展至 S23 站位的 60 m，未在更深水
域检测到目标信号。同时，在 S22 站位的 11 m
34.62%) 检出三疣梭子蟹 eDNA 阳性，分布于 16
个采样站位 (其站位检出率 55.17%)。eDNA 浓度 水深处记录到整个调查中的最高 eDNA 浓度，达
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在不同采样站位间呈现显著的空间异质性 (P< 2.36×10 拷贝/L。
0.001)，高值区主要集中分布于鱼山渔场周边站 为探讨三疣梭子蟹夏、秋季的分布特征，本
位 (如 S14、S22、S26、S29 站位)。分水层看，表 研究比较了在相同采样站位下，夏季 (8 月) 与秋
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层的平均 eDNA 浓度最高 (1.7×10 拷贝/L)，其次 季 (11 月) 三疣梭子蟹 eDNA 浓度的差异。结果显
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为中层 (1.5×10 拷贝/L) 和底层 (1.0×10 拷贝/L)。 示，夏季 eDNA 浓度平均值为 1.4×10 拷贝/L(站
4
4
5
5
其中，S29 站位的表层浓度最高，为 3.77×10 拷 位检出率 55.17%)，秋季平均值为 6.05×10 拷贝
贝/L。同期底拖网调查结果显示，平均生物量为 /L(检出率 59.49%)。秋季检出率及 eDNA 平均浓
2
109.60 kg/km ，最高生物量出现在舟山渔场附近 度均显著高于夏季，秋季 eDNA 平均浓度也高于
2
的 S06 站位 (2 843.99 kg/km )。总之，eDNA 调查 夏季。垂直分布分析显示，秋季 eDNA浓度较高，
结果与同步底拖网调查在主要分布区及部分站位 分 布 水 域 较 广 ， 主 要 集 中 于 0~30 m 中 表 层 及
上具有较高一致性 (图 2)。 40~50 m 部分深层水体；夏季 eDNA 浓度较低，
与夏季相比，秋季 eDNA 的检出率与浓度均 集中分布在 0~30 m 表层及中层水体 (图 5)。

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