Page 128 - 《水产学报》2026年第04期
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4 期                                     水    产    学    报                                 50 卷

                   长期以来，针对长江口及邻近海域的鱼类资                                 N
                                                                   34°
              源调查主要依赖于底拖网等传统方法                  [7-9] 。尽管积                调查站位 survey stations
                                                                   33°
              累了宝贵的历史数据，但传统方法存在人力物力
                                                                   32°
              消耗大、对生物及生境造成干扰、难以有效监测
              稀有种或回避性鱼类等局限性，限制了其在大范                                31°
              围、高频次监测中的应用。环境                DNA (eDNA) 技           30°
              术通过检测环境中生物体释放的               DNA  片段来评估              29°
              物种的存在与多样性，具有灵敏度高、非侵入性、                               28°
              可同时检测多物种等优势            [10-12] 。eDNA  宏条形码技
                                                                   27°
                                                                                        0  90 180  360 km
              术是指利用       metabarcoding  技术对环境样本中的
                                                                   26°
              DNA  进行扩增和高通量测序，从而鉴定出环境样                               120°   122°   124°   126°   128° E
              本中的所有物种，具有操作便捷、非侵入性、耗                                   图 1    长江口及其邻近海域采样站点
              时短、成本低等优点          [10,13] 。eDNA  宏条形码技术已        Fig. 1 Sampling stations in the Yangtze River Estuary
              在国内外河口、近海生态系统的鱼类监测中展现                                          and adjacent waters
              出巨大潜力，其调查结果与传统方法具有良好的
                                                               盐度。现场设置以无菌水为样品的空白对照，全
              一致性，并能提供补充性信息              [13-15] 。
                                                               程监控潜在污染。
                   近年来，国内学者开始将              eDNA  宏条形码
                                                                   选择春季 (4—5     月) 和秋季 (10—11     月) 开展
              技术应用于长江口及东海近海的鱼类多样性研
                                                               调查，主要基于以下考虑：春季正值多数鱼类产
              究 [16-17] ，证实了其适用性。然而，针对长江口及其
                                                               卵繁殖期前后，鱼类活动频繁、集群性增强，是
              邻近海域鱼类群落结构的多时间尺度 (季节与年
                                                               监测繁殖群体的关键窗口；秋季则对应多数鱼类
              际) 变化仍缺乏系统性的          eDNA  监测研究。群落结
                                                               的索饵育肥期和越冬洄游前期，此时群落组成相
              构的时空动态是理解生态系统响应环境变化与人
                                                               对稳定，且经伏季休渔后生物量较高，有助于全
              为 干 扰 的 关 键 。 基 于 此 ， 本 研 究 于       2022  年 和
                                                               面反映区域鱼类资源状况。选择这两个季节进行
              2024  年的春、秋两季，在长江口及其邻近海域系
              统性地开展基于         eDNA  宏条形码技术的鱼类多样                调查能够较好地覆盖鱼类生活史的关键阶段，从
              性调查，旨在评估          eDNA  宏条形码技术应用于该               而更系统地揭示群落结构的季节性演替规律。
              典型河口海域鱼类多样性监测的可靠性；揭示长                             1.2    eDNA  富集、提取与测序
              江口海域鱼类群落结构的季节变化与年际动态特
                                                                    eDNA  富集与   DNA  提取  采集的水样立
              征；探讨群落结构的演变趋势及其潜在的生态学
                                                               即在船载实验室内进行过滤处理。通过蠕动泵使
              启示，以期为长江口生态系统的保护与渔业资源
                                                               水样依次通过孔径为          20 μm  的尼龙预过滤膜 (Mil-
              可持续利用提供新的数据支撑与决策依据。
                                                               lipore，美国) 和   0.22 μm  的聚碳酸酯滤膜 (Milli-
               1    材料与方法                                      pore，美国)，以分别去除大型颗粒和富集微生物
                                                               及游离   DNA。所有过滤器材均预先用               0.3%  有效
               1.1    研究区域与样本采集                                氯的次氯酸钠溶液浸泡消毒。富集有                    eDNA  的
                                                               0.22 μm  滤膜用无菌镊子取出，置于无菌铝箔中，
                   本研究于    2022  年春季 (4—5   月)、秋季 (10—
                                                               立即投入液氮冷冻，后转入−80 ℃              超低温冰箱保
              11  月) 及  2024  年春季 (4—5  月)、秋季 (10—11   月)，
              在 长 江 口 及 其 邻 近 海 域  (北 纬     26°~32°， 东 经       存待用。使用海洋动物组织基因组                DNA  提取试剂
              121°~127°) 共设置了    23  个采样站位 (图     1)。该区        盒  [ 天根生化科技      (北京) 有限公司      ] 提取滤膜上
              域涵盖了河口锋面区、近岸混合水域及外侧受                             DNA，具体操作参照说明书。采用超微量分光光
              外海水影响的区域。每个站位使用无菌采水器采                            度计 (Thermo NanoDrop One) 检测   DNA  浓度与纯
              集表层海水 (水深≤1 m) 和底层水 (距海底约                2 m)    度 (A 260 /A 280 )。
              1.5 L，分别装入无菌水采样袋中，每站设置                   3  个         PCR  扩 增 与 测 序     使 用 针 对 鱼 类      12S
              平行样本。采样同时记录站位坐标、表层水温及                            rRNA  基因的通用引物        MiFish-U (5’-GTCCGTAA-

              https://www.china-fishery.cn                           中国水产学会主办    sponsored by China Society of Fisheries
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