Page 90 - 《水产学报》2025年第12期

李雪珽，等 水产学报, 2025, 49(12): 129308

N N
ij ij
30°13′ 调查站位`survey stations
30°15′
Z02
舟山群岛 Z03 青浜岛
30°00′ Zhoushan Islands 30°12′ 庙子湖岛 Qingbang Island
Miaozi Lake Island
Z01
Z06
宁波市
Ningbo Z04 西福山岛
Z05 Xifushan Island
29°45′ 30°11′
东福山岛
中街山列岛 Dongfushan Island
Zhongjieshan Islands
29°30′ 0 1 km
122°00′ 122°15′ 122°30′ 122°45′ E 122°41′ 122°42′ 122°43′ E

图 1 柳珊瑚采样站位
Z01. 天然海藻场，Z02. 沙滩外缘礁石，Z03、Z04. 往复流区域，Z05. 筏式贻贝养殖区，Z06. 人工鱼礁区，下同。
Fig. 1 The sampling area and distribution of stations
Z01. natural seaweed bed, Z02. rocks at the outer edge of the sandy beach, Z03, Z04. tidal current area, Z05. raft mussel culture area, Z06. artificial reef
area, the same below.
天然海藻场和沙滩外缘礁石，本研究将其列为 镁离子 0.95~1.15 g/L，钾离子 0.33~0.44 g/L，钙
单一天然生境组 (简称“DY”)；Z05 和 Z06 分别 离 子 0.30~0.42 g/L， 铅 ≤0.000 05 g/L， 镉 ≤
为筏式贻贝养殖区和人工鱼礁区，本研究将其 0.000 01 g/L，汞≤0.000 01 g/L，砷≤0.000 02 g/L，
列为人工生境组 (简称“RG”)。Z03 和 Z04 因受 亚硝酸盐＜0.000 4 g/L，六价铬＜0.000 01 g/L，
到庙子湖岛东侧和青浜岛西侧狭窄水道的高强 活性磷酸盐＜0.000 01 g/L。培养基 pH 控制于
度往复流的驱动，与 Z01 和 Z06 水体交换频繁， 7.6±0.2，菌板在 28℃ 恒温培养箱中倒置培养。
本研究将其列为复合天然生境组 (简称“FH”)。 样品预处理 用无菌水冲洗柳珊瑚样品
1.2 样品采集 3~5 次，去除枝条上的黏液。用灭菌剪刀将枝
条剪碎，低温环境下研磨成匀浆状，用无菌滴
由潜水员于水下挑选新鲜挺拔、颜色明艳
管吸取 1 mL 研磨物至 9 mL 无菌水中，振荡均
的健康柳珊瑚，分 6 个站位进行采集。样品出
匀，得到柳珊瑚样品稀释液。以上操作均在超
水后迅速装入无菌封口袋，加入封口袋容量
净工作台中进行。
1/3 的海水浸泡柳珊瑚枝条，并将袋中多余气体
真菌分离培养 按照配方配制 2 种培养
[33]
挤出，密封好保存于冷藏箱中 。24 h 内运送
基，控制盐度为 30，加热搅拌直至微沸，待培
至实验室进行预处理，尽快完成菌株分离，避
养基干粉及颗粒物完全溶解后转移至锥形瓶中。
免因长时间暴露于环境压力源，致使柳珊瑚腐
经高压灭菌锅 121℃ 灭菌 15 min 取出，冷却至
坏或共附生真菌活力降低导致分离效果不佳的
55℃ 倾注平板，琼脂平板静置至完全凝固后使
情况出现。
用。用无菌滴管吸取 1 mL 样品稀释液滴入培养
1.3 样品培养与处理 基平板中，再用无菌涂布棒均匀涂布至培养基
培养基配方及培养条件 马铃薯葡萄糖 平板琼脂表面无液滴，于 28℃ 恒温培养箱中倒
琼脂培养基 (PDA)：马铃薯浸粉 5.0 g/L，葡萄 置培养。每日观察菌种生长情况，一旦出现新
糖 20.0 g/L，琼脂 15.0 g/L，氯霉素 0.1 g/L。人 菌落即用无菌接种棒挑取，在新的培养基琼脂
工海水：氯化钠 27.5 g/L，氯化镁 5.0 g/L，硫 平板中划线培养，直至纯化出单一菌落。将分
酸镁 2.0 g/L，氯化钾 1.0 g/L，氯化钙 0.5 g/L， 离出的菌种从分离培养基平板中取出，通过点
硫酸亚铁 0.001 g/L。海水晶：氯离子 17.0~19.3 植移至富集培养基琼脂平板上，于 28℃ 恒温培
g/L，钠离子 9.9~11.0 g/L，硫离子 2.2~2.6 g/L， 养箱中倒置培养，用于后续实验。

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