Page 189 - 《水产学报》2025年第6期
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周梓华,等 水产学报, 2025, 49(6): 069616
表 1 太阳长棘海星亲本的规格及生殖排放过程
Tab. 1 The size of parent A. solaris and their gamete release process
序号 性别 中央盘直径/ cm 注射时间 产卵/排精起始时间 持续时间
no. gender diameter of central disc injection time releasing time duration
1 ♀ 13.0 20:47 21:15 40 min
2 ♀ 12.8 20:55 21:09 50 min
3 ♀ 11.4 23:16 23:36 34 min
4 ♂ 9.0 21:13 21:23 1 h 35 min
5 ♂ 11.1 21:24 21:48 1 h 40 min
6 ♀ 10.5 22:45
另外,设计一变态附着实验:将实验获得 卵子和 2 个父本的精子。待产卵结束后将父/母
的有腕幼虫分成两批,分别放置于无附着基 (空 体转移离开。人工授精前检查卵子发生泡是否
白底缸) 和有附着基 (珊瑚石) 的实验培养缸中, 破裂,待发生泡破裂,将经镜检鉴定活跃的精
数天后,分别统计幼虫的变态率。 子加入卵子缸中,前期加入少量精子,后续根
据卵子的受精镜检结果 (初级卵膜出现与否),
1.3 性别鉴定
视情况以“多次少补”的形式补充精子 (图 2),直
借助 5 mL 的注射器辨别长棘海星的性腺
至镜检视野里所有卵子受精。为防止精子污染,
发育时期和雌雄性别。将 5 mL 注射器扎入长棘
每步操作前均用淡水清洗双手和实验工具。
海星腕部的基底处,抽取性腺 1 mL 并放置于光
1.5 受精孵化
学显微镜下观察,若有卵径为 200 μm 的卵子即
可判断为可用于繁殖的雌性个体;性腺发育时 受精后,将子代群体平均分为 3 个实验组,
期由性腺分叶 (gonad lobe) 的颜色和卵子的个体 每组实验均微曝气培养。太阳长棘海星在 28~
形状、大小以及精子的活力辅助判断。共挑选 31 ℃、盐度 30~35、pH 8.0~8.3 条件下的孵化
成熟期的 4 雌 2 雄个体开展实验 (图 1)。 时间约 48 h (表 2),孵化期间,若由于受精卵密
度过大,受精卵聚团并附着于养殖缸底部时,
提高搅拌频率,以提高孵化成功率。经过受精
卵、第一极体、第二极体、2 细胞期、4 细胞期、
多细胞期、桑葚胚期、囊胚期、原肠胚期等发
育阶段,孵化至早期羽腕幼虫 (表 2)。孵化后,
保持浮游幼虫密度在2 个/mL。
1 cm
(a) (b) 1.6 浮游幼虫培养
图 1 雌雄性腺 将 3 组实验浮游幼虫通过虹吸的方式,抽
(a) 雌性,(b) 雄性。
滤至 150 目的筛绢网上选优培养。选优后,3
Fig. 1 Female and male gonad of A. solaris
组实验幼虫分别混合均匀并移至室内的培养缸
(a) female, (b) male.
中,同样保持微充气培养,保持温度在 29 ℃。
培养期间,根据实验设计,每天投喂足量的牟
1.4 配子排放
氏角毛藻和市场上销售的牟氏角毛藻藻粉,早
将亲本分别单独放置于养殖缸中培养。用 晚共投喂 2 次。为保证培育过程无杂质混入,
2% 浓度的 NaCl 溶液配制 1 mmol/L 的 1-甲基腺 饵料投放前,均用 200 目的筛绢网过滤,以滤
嘌呤 (1-methyl-adenine,购于上海麦克林生化科 掉藻粉残渣和藻类分泌物。实验期间全程全/半
技股份有限公司) 催产剂 [15, 18] 。将新鲜配制的 遮光培养,每隔 3 天更换 1 次海水,换水前,
10 mL 催产剂注入雌性个体的腕足基部位置, 抽取 10 mL 海水,计算浮游幼虫个体密度、孵
片刻后,收集精卵配子。分开收集 4 个母本的 化率和畸形率,每组实验测量 3 次;同样抽取
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