Page 178 - 《水产学报》2023年第1期

姜鹏飞，等 水产学报, 2023, 47(1): 019113

表 1 Scarb1 基因克隆、表达检测和 RNA 干扰试验的引物
Tab. 1 Primers designed for cloning, expression detection and RNA interference of Scarb1 gene
引物 序列(5′-3′) 用途
primers sequences usage
Scarb1-1F GACGTGGACGAGATGAAGGT Scarb1序列1
Scarb1-1R GTTGACGAAGGGGATGTTGA

Scarb1-2F TCTAAAGGGAGCGAGAACGA Scarb1序列2
Scarb1-2R CGTGAGAGCTGTGCAGAGAG
Scarb1-3F CTCTCTGCACAGCTCTCACG Scarb1序列3
Scarb1-3R GCATCTCACTCCGCCTACTC
Scarb1-qpcr1-F ACATCTTCCACAGTGTCCGT Scarb1荧光定量引物
Scarb1-qpcr1-R ATCTGACGTCTCCTCCTCCT
Es-S27-F GGTCGATGACAATGGCAAGA 内参引物S-27
Es-S27-R CCACAGTACTGGCGGTCAAA
Scarb1-ds-F GCTGAACCAGTGGAGTGTTG dsRNA引物
Scarb1-ds-R AGACAGGTGAGGCTGGAAGA
Scarb1-T7-ds-F taatacgactcactatagggGCTGAACCAGTGGAGTGTTG dsRNA引物(带T7)
Scarb1-T7-ds-R taatacgactcactatagggAGACAGGTGAGGCTGGAAGA

Scarb1-W1-F TACCCACGAACAGGAGAAGG Scarb1 SNP筛选引物
Scarb1-W1-R TCGTTCTCGCTCCCTTTAGA

用于组织学观察。组织学观察采用常规的石蜡切 2 结果
片，并在显微镜下 (LEICA-DM500) 观察拍照。
2.1 中华绒螯蟹 Scarb1 的基因结构与同源性
取适量肝胰腺组织与丙酮按照 0.1 g/mL 比例
分析
混合，用超声波破碎机 (XM-150T) 进行破碎，破
碎完成后置于离心机中 3 000 r/min，4 °C 离心 5 经克隆和测序，中华绒螯蟹 Scarb1 由 2 个外
显子 (1 012、1 403 bp) 和 1 个内含子 (32 181 bp)
min，吸取上清 1.5 mL，重复 3 次；使用紫外分光
组成，其开放阅读框全长为 2 415 bp(GenBank 登
光度计 (EVO-60) 于波长 447 nm 处测定吸光度值，
录号：OM 824 436)，共编码 805 个氨基酸，具有
用于肝胰腺类胡萝卜素含量测定。
一个 CD36 结构域。氨基酸序列多重比对和相关
1.5 Scarb1 的 SNP 筛选与生长性状关联分析 物种构建的系统进化树 (图 1) 表明，中华绒螯蟹
设计扩增 Scarb1 第一外显子部分序列的引 与三疣梭子蟹的同源性最高，氨基酸序列的相似
性达 80.51%，与同为节肢动物的对虾类物种的同
物 (表 1)，取本实验室前期实验的 175 只中华绒螯
源性在 72.84% 以上，Scarb1 在不同物种间具有较
蟹蜕壳后增长率数据，参见本实验室方法进行
高的保守性。
DNA 提取和 PCR 扩增 [19] ，产物送生工生物工程
(上海) 股份有限公司测序。使用 Bioedit 软件比对 2.2 中华绒螯蟹 Scarb1 基因的时空表达分析
序列并结合峰图筛选 Scarb1 的 SNP 位点。随后将 研究发现，中华绒螯蟹 Scarb1 在不同蜕壳时
筛选到的 SNP 位点与 175 只蟹的生长性状 (蜕壳 期的肝胰腺、肠道、血淋巴细胞、心脏、鳃和肌
后的增重率、壳长增长率、壳宽增长率) 进行关联 肉组织中均有表达。综合来看，在肝胰腺、肠道
分析，使用 Graphpad Prism 9.0.0 将生长性状与基 和血淋巴细胞中的表达量相对较高，如蜕壳前期
因型进行统计显著差异性检验。对筛选出的 SNP 血淋巴细胞中的表达量最高 (图 2-a)，蜕壳后期肝
位点进行生长性状的百分位排序统计，分析基因 胰腺的表达量最高 (图 2-a)，蜕壳间期肠道中的表
型频率在百分位中的分布特征。 达量最高 (图 2-a)，而肌肉组织在 3 个蜕壳时期的

中国水产学会主办 sponsored by China Society of Fisheries https://www.china-fishery.cn
3