Page 42 - 《渔业研究》2026年第3期
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第 3 期                    田    田等： 斑鳜早期性腺分化与发育的组织学观察                                    335

              技术和模式      [8, 14] 、遗传多样性  [15]  及形态学研究   [16]    1.3 切片的组织学观察与图片处理
              等领域，对性腺发育方面的研究较少。冉辉等                      [12]       在  Olympus FX380  显微镜下开展观察并进行
              和杨武   [17]  分别对锦江河和长江水系野生斑鳜的性                    图片采集，随后借助        CaseViewer 2.4  软件进行测量并
              腺发育进行了跟踪观察，而养殖斑鳜早期性腺分化                           截取相关图片。性腺分期主要依据刘筠                  [18]  与楼允
              与发育方面的研究还未见有报道。本研究以人工繁                           东 [19]  的分期标准，各时相的判定参考刘筠          [18]  的方法。
              育的斑鳜仔鱼、稚鱼和幼鱼为研究对象，采用连续
              石蜡切片技术和苏木精−伊红（Hematoxylin-eosin，                  2 结果与分析
              HE）染色法，对斑鳜性腺的发育进程进行组织学                            2.1 斑鳜原始性腺发育
              观察与分析，初步确定斑鳜早期性腺分化的关键时                               7  日龄，斑鳜平均全长为（1.04±0.11）cm，已
              间节点和发育特征，旨在丰富斑鳜发育生物学基础                           出现成对原始性腺（Primitive gonad，PG） （图        1A） ，
              研究资料，并为斑鳜单性别育种研制提供一定的理                           位于中肾管（Mesonephric duct，MD）与肠道间的
              论参考。                                             体腔膜（Coelarium，C）两侧，性腺横切面呈梨形
                                                               或椭圆形。此时原始性腺还未分化，基质内具有
               1 材料与方法
                                                               1~2  个原始生殖细胞（Primitive germ cell，PGC）
               1.1 实验材料与取样                                     （图  1B） ，呈圆形或椭圆形，体积明显大于周边
                  实验用斑鳜为       2024  年  5  月项目组自行繁育的           细胞，细胞长径为        4.34~5.94 μm，细胞核（Nucleus，
              初孵仔鱼，在室内培养箱（0.72 m×0.53 m×0.43 m）                Nc）占比大、染色浅，核长径为              3.30~4.62 μm，核
              常温培育，24 h     不间断充氧，水温为          21.5~29.8 ℃，    膜清晰，核仁（Nucleolus，Nu）染色深，长径为
              每天定期吸污        2  次，并换水     1/4~1/3。自仔鱼开          1.49~1.95 μm。
              口，全程投喂活饵料鱼，主要投喂团头鲂（Megalo-                           12  日龄，斑鳜平均全长为（1.39±0.18）cm，
              brama amblycephala）、锦鲤（Cyprinus carpio haema-    原始性腺体积明显增大，横切面呈棒形或长囊形
              topterus）等水花苗。                                   （图  1C） 。原始生殖细胞数量有所增加，呈圆形
                  自仔鱼    2  日龄（Day post hatching，dph）开始        或卵圆形，与其他细胞存在明显间隙，细胞质染色
              平游至    62  日龄，每   5 d  采集  1  次样本，每次随机           浅且呈淡红色，细胞长径为             8.22~10.45 μm，细胞
              捞取   15  尾斑鳜。先测量鱼体全长，再用              4%  多聚      核染色深且呈淡紫色，核膜清晰，核长径为                    5.49~
              甲醛对全鱼进行固定保存。福建省淡水水产研究所                           8.35 μm，核仁着色重且呈深紫色，位于核中央或
              实验动物管理和伦理委员会审批动物试验，批准编                           偏位，长径为      1.44~2.02 μm（图  1D） 。
              号为   FFRIFJ-DW-2024-16。                              17  日龄，斑鳜平均全长为（1.58±0.16）cm，
               1.2 石蜡组织切片                                      原始性腺体积进一步增大，横切面呈梨形或长囊形
               1.2.1 切片的制备与染色                                  （图  1E） 。在性腺原基内可观察到微血管（Blood
                  将固定后的样本先用           70%  酒精冲洗，再依次            vessel，BV）和血细胞（Blood cell，BC） ，原始
              经过   50%、70%、80%、95%      和  100%  乙醇进行梯         生殖细胞通过有丝分裂形成生殖细胞（Germ cell，
              度脱水，后经二甲苯透明、石蜡浸透和包埋并制备                           GC） （图   1F） 。生殖细胞多为圆形或椭圆形，体
              组织切片。采用        LEICA-RM 2016  切片机进行连续            积较原始生殖细胞小，细胞长径为                3.8~4.3 μm，细
              横切，切片厚度为          4 μm。经   HE  染色后，使用中           胞核呈蓝紫色，核膜清晰，核长径为                  2.7~3.2 μm，
              性树胶封片保存。                                         核仁不明显。
               1.2.2 切片方案的确定                                    2.2 斑鳜精巢的分化及发育
                  预实验阶段对比了性腺单独切片与全鱼整体切                             17  日龄，部分斑鳜性腺横切面较为细长（图             2A），
              片两种制备方法。采用性腺单独切片获取的切片质                           性腺基质内出现管腔状输精管原基（Spermaduct
              量不理想，组织分散、完整性差，不利于形态学观察。                         anlage，SD），表明原始性腺开始向精巢分化（图              2B）。
              全鱼整体切片较好地保持了性腺组织的原位结构与                           生殖细胞经有丝分裂形成精原细胞（Spermatogonia，
              形态，切片质量更为理想，组织的连续性及完整性                           SG） ，精原细胞体积较生殖细胞小，胞膜和核膜清
              高，便于后续的显微观察与判定。因此，正式实验                           晰，细胞核占比较大，染色较细胞质深且呈蓝紫色，
              统一采用全鱼切片法，以保障组织学分析的可靠性。                          细胞长径为     2.9~4.3 μm，细胞核长径为       1.1~1.9 μm。
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