Page 210 - 《水产学报》2025年第6期
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龚之頔，等                                                                 水产学报, 2025, 49(6): 069118

              1    材料与方法                                       法进行正反向测序，所采用的引物              [10]  为  LCO-1 490
                                                               (5'-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3')

              1.1    实验材料                                      和  HCO-2 198 (5'-TAAACTTCAGGGTGACCAAA
                   黄氏纺锤水蚤样品于           2020  年  7—8  月采用       AAATCA-3')。
              浅水Ⅱ型浮游生物网           (孔径约    160 μm) 采集于厦             通过   DNAMAN 7    软件对获得的序列进行
              门湾附近水域        (24.47°N，118.07°E)。复检标本            正反向拼接后，共同导入             MEGA 7   软件进行多
              为 实 验 室 保 存 的 台 湾 海 峡 样 品        (2004 —2015     重序列比对，将两端截齐后获得              557 bp  的  mtCOⅠ

              年) [7-8] 。用于比对研究的洪氏纺锤水蚤              (A. hongi   基 因 片 段 。 使 用      MEGA  7  软 件 ， 以   Jukes-
              Soh & Suh, 2000) 样品于    2023  年  4  月采自江苏        Canter 模型  (同时考虑转换和颠换) 计算遗传距
                                                                 [11]
              如东   (32.63°N，121.13°E)。用于形态学观察的                 离 。基于      Tamura-Nei 模型以非加权组平均法
              样品采用     5%(体积分数) 缓冲甲醛溶液固定，用                     (unweighted  pair  group  method  with  arithmetic
              于分子生物学分析的样品则保存于无水乙醇中。                            means, UPGMA) 构建系统发育树，各分支的置
                   实验过程中操作人员严格遵守实验动物伦                          信度经过重复抽样分析             (bootstrap test) 1 000  次
              理规范，并按照厦门大学实验动物中心制定的                             检验  [12]  获得。其中，以     GenBank  数据库中红纺
              规章制度执行。                                          锤水蚤    (A. erythraea s. l.) [13-14]  的序列作为近缘参

                                                               照，本研究获取的洪氏纺锤水蚤序列为外源参照。
              1.2    形态观察
                   在体视显微镜        (Motic SMZ-168) 下对样品          2    结果
              进行种类鉴定、形态观察及解剖；通过光学显
                                                               2.1    黄氏纺锤水蚤
              微 镜   (Zeiss  Primo  Star) 及 显 微 镜 相 机  (Mshot
              MDX1-T) 拍摄光镜照片并测量体长数据；采用                             https://zoobank.org/2E2A980A-142D-4E61-
              图像处理软件        (Photoshop 2017) 对外形及附肢的           A87B-9A2BE3AEA0A8

              光镜照片进行临摹及加工以完成绘图。                                    模 式 标 本     正 模     (XOB-PC-AH 001♀)，
                   使用叔丁醇冻干法 对纺锤水蚤样品进行                          配 模  (XOB-PC-AH  002♂)， 副 模     (XOB-PC-AH
                                     [9]
              干燥后，将样品用导电胶黏贴于扫描电镜专用                             003~020，9♀9♂)。王龙升于         2020  年  7—8  月采
              载物台上。经离子溅射镀膜仪                (Quorum SC7620)     自厦门湾附近水域          (24.47°N，118.07°E)，保存
              以  15 mA  喷金镀膜     1 min  后，使用台式扫描电              于厦门大学海洋科技博物馆。

              镜  (Phenom ProX) 拍摄扫描电镜照片。                           复 检 标 本     台 湾 海 峡      G0  站  (24.04°N，

                                                               118.19°E，2004  年  8  月  7  日，水深  20 m，0.12
              1.3    线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ (mtCOⅠ) 基因
                                                                   3
                                                               个 /m )、 B0  站  (23.31°N， 117.22°E， 2005  年  7
              序列扩增与分析
                                                               月  6  日，水深  33 m，2.67 个/m )、A5  站  (23.06°N，
                                                                                         3
                   使 用  DNA  提 取 试 剂 盒    (FastPure Cell/Tis-  118.42°E，2006  年  6  月  20  日，水深  30 m，1.29
              sue DNA Isolation Mini Kit，南京诺唯赞生物科              个/m )、Y31   站  (25.06°N，119.42°E，2014   年  7
                                                                   3
              技股份有限公司) 对单只纺锤水蚤的基因组                             月  16  日 ， 水 深  23  m， 39.47  个 /m )、 Y32  站
                                                                                                 3
              DNA  进行提取，具体方法参照试剂盒说明书。                          (24.97°N，119.60°E，2014   年  7  月  16  日，水深
              利用热循环仪        (K960，杭州晶格科学仪器有限                   50 m，13.04 个/m )、Y13  站  (25.71°N，120.44°E，
                                                                              3
              公司) 扩增     mtCOⅠ基因片段，PCR         反应体系总           2014  年  7  月  17  日 ， 水 深  62  m， 0.86  个 /m )、
                                                                                                        3
              体积   50 μL，其中基因组        DNA  模板   5 μL，正反        Y14  站  (25.54°N，120.66°E，2014  年  7  月  17  日，水
              向引物各      2 μL (10 μmol/L)，2×Phanta Max Mas-     深  70 m，1.52 个/m )、Y12  站  (24.97°N，119.60°E，
                                                                               3
              ter Mix 25 μL，纯水   16 μL。PCR   反应程序：94           2014  年  11  月  1  日，水深  50 m，13.04 个/m )、
                                                                                                        3
              °C  预变性   4 min；94 °C  变性  l min，40 °C  退火  l    Y04  站  (25.83°N，121.15°E，2015  年  7  月  14  日，
                                                                                  3
              min，72 °C  延伸 l min，循环      35  次；最后   72 °C     水深  87 m，0.60 个/m )

              充分延伸      10 min。PCR  产物经电泳检测后，交                     雌性特征  体长            (1.25±0.03) mm (1.19~
              由生工生物工程         (上海) 股份有限公司以           Sanger    1.30 mm，n=10)。头胸部呈纺锤形，额部前端

              https://www.china-fishery.cn                           中国水产学会主办    sponsored by China Society of Fisheries
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